[发明专利]生物识别探针的构建方法及其逻辑运算方法

权利要求书

1.一种生物识别探针的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）.分别制备金银核壳纳米立方体Au@AgNCs溶胶和四面体结构DNA溶液，并将所述Au@AgNCs固定于氧化铟锡导电膜玻璃表面；

2）. 将所述四面体结构DNA溶液滴加到固定有Au@AgNCs的氧化铟锡导电膜玻璃表面，室温下孵育2~6 h后，用超纯水洗涤，并用氮气吹干，得到基于tsDNA的单颗粒局域表面等离子体共振LSPR探针；

所述四面体结构DNA溶液的制备方法包括如下步骤：

2.1）将各条单链DNA溶解，在紫外分光光度计下测定260 nm处的吸收，并参考每条单链DNA的摩尔消光系数，确定其浓度；

2.2.）将四条单链DNA以等比例混合于TM缓冲液中，加入三（2-氯乙基）磷酸酯后，转入聚合酶链式反应仪中，在90~98℃下持续10~15 min后，迅速降温至0~5℃，得到tsDNA溶液。

2.如权利要求1所述的生物识别探针的构建方法，其特征在于，所述Au@AgNCs溶胶的制备方法包括如下步骤：

1.1）.合成纳米金种子；

1.2）.将所述纳米金种子与十六烷基三甲基氯化铵进行反应，得到金溶胶；

1.3）.将所述金溶胶与抗坏血酸在40~80℃下进行反应后，加入硝酸银，反应后得到Au@AgNCs溶胶。

3.如权利要求1所述的生物识别探针的构建方法，其特征在于，所述Au@AgNCs在氧化铟锡导电膜玻璃表面的固定方法为：

将氧化铟锡导电膜玻璃的表面清洗干净后，浸入到Au@AgNCs溶胶中，静置1~5 min后取出，用超纯水清洗并用氮气吹干，即可。

4.一种基于权利要求1所述构建方法制备的生物识别探针对核酸内切酶检测的逻辑运算方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.1）制备Au@Ag NC-tsDNA₁₇探针分子和靶分子MicroRNA-21的纳米复合物；

3.2）定义当在所述纳米复合物中加入核酸内切酶KpnI和/或StuI时，输入为“1”，当核酸内切酶KpnI或StuI不存在时，输入为“0”；

3.3）以所述纳米复合物LSPR散射λ_max的蓝移量∆λ_max-blue作为输出，并设定输出的临界值，当∆λ_max-blue大于该临界值时，输出为“1”，反之，输出为“0”。

5.一种基于权利要求1中所述构建方法制备的生物识别探针针对MicroRNA-21和核酸内切酶检测的逻辑运算方法，其特征在于，包括如下步骤：

设定以单个Au@Ag NC-tsDNA₁₇探针分子中加入靶分子MicroRNA-21作为一种输入，加入核酸内切酶KpnI和StuI作为另一种输入，以单个Au@Ag NC-tsDNA₁₇探针分子在加入靶分子miR-21和/或核酸内切酶后的的LSPR散射λ_max的红移量∆λ_max-red作为输出；

设定输出的临界值；当∆λ_max-red大于所述临界值时，输出为“1”；当∆λ_max-red小于所述临界值时，输出为“0”。