[发明专利]胶质瘤预后标志物circ11:66639700|66640123及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤预后的circRNA标志物、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤预后制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

胶质瘤(Glioma)是颅内最常见的肿瘤，其发病占颅内原发肿瘤的50％以上，也是治疗难度最大的肿瘤之一。根据1997年WHO病理分级标准，依据其恶性程度胶质瘤可分为四级，Ⅰ级：纤维型星形细胞瘤，好发于8～13岁；Ⅱ级：低度恶性星形细胞瘤(LGA)，占所有神经胶质瘤的25％，好发于30～40岁；Ⅲ级：退变型星形细胞瘤(AA)，易转化为Ⅳ级；Ⅳ级：多形性胶质母细胞瘤(GBM)，好发年龄为45～60岁。目前胶质瘤的治疗主要采用手术切除及放化疗等常规手段。但由于胶质瘤具有边界不清晰、局部浸润能力强、肿瘤生长速度快等特点，进而导致了肿瘤切除难度高，切除不彻底，术后复发率高等问题，并且手术切除对正常神经的功能也会造成损伤；而由于血脑屏障的存在，使得很多化疗药物难以到达治疗位点；放疗对胶质瘤的治疗作用有限，而且可能会引起正常组织的癌变。所以，寻找胶质瘤的有效治疗靶点仍然是目前神经外科医生亟待解决的难题。

circRNA是一类广泛且多样地存在于哺乳动物细胞中、具有调控基因表达作用的内源性非编码RNA分子，具有共价闭合的环形结构，广泛存在于各种细胞中，也是继microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究热点。近年来，随着深度测序技术的广泛应用和生物物理和信息学技术的快速发展，人们发现人类许多外显子的转录本可被非线性地反向剪接或通过基因重排而形成circRNA，且它们在所有剪接转录本中占了相当大的比例，并具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特征，有作为诸多疾病分子标志物的潜力。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤患者预后的脑组织来源的CircRNA标志物circ11:66639700|66640123，其序列如SEQ NO:1所示。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的CircRNA标志物在脑组织中表达量的试剂在制备胶质瘤预后制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤预后试剂盒，能够测定脑组织中的circ11:66639700|66640123的含量。

所述的胶质瘤预后试剂盒，含有检测circ11:66639700|66640123含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤预后试剂盒，除circ11:66639700|66640123的引物外，还含有从脑组织中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。包括：

(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；

(2)以总RNA为模板将circ11:66639700|66640123逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及circ11:66639700|66640123所用随机引物；

(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括circRNAcirc11:66639700|66640123实时荧光定量PCR特异性引物、GAPDH内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。

申请人通过荧光定量PCR与生存曲线分析发现在22例胶质瘤患者中，胶质瘤组织来源的circRNA circ11:66639700|66640123与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高。此法为胶质瘤的预后分析提供了强有力的技术支持，有助于提高胶质瘤患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义和推广性。

附图说明

图1为实时荧光定量PCR分析circ11:66639700|66640123在正常脑组织与

胶质瘤中的表达差异；

图2为生存曲线分析胶质瘤组织来源的circ11:66639700|66640123表达高

低对胶质瘤患者的预后影响。

具体实施方式

以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。

实施例1制备检测circRNA circ11:66639700|66640123表达量的试剂用于制备胶质瘤患者预后的试剂盒(50次反应)

1.RNA稳定溶液 50ml

2.异丙醇 100ml

3.三氯甲烷 100ml

4.Trizol 50ml

5.无酶水 10ml