[发明专利]胶质瘤预后标志物circ19:5604583|5604936的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤预后的circRNA标志物的应用。

背景技术

胶质瘤亦称神经胶质细胞瘤，包括多种发生于神经外胚层细胞的肿瘤，国内报告约占颅内肿瘤的35.26％～60.96％(平均44.69％)。其分类尚缺乏统一意见，近来文献上常依其恶性程度分为低分级和高分级二种。低分级胶质瘤约占颅内肿瘤的10％～15％，包括一一般病理学分类的I～Ⅱ级星形细胞瘤、毛细胞型及肥胖细胞型星形细胞瘤、纤维型及原浆型星形细胞瘤、轻度间变性星形细胞瘤、少支胶质瘤及神经节胶质瘤等；生存时间约为5～10年，5％～50％可达10年以上，30％病例有恶性升级的经历。高分级胶质瘤亦称恶性胶质瘤，包括一般病理学分类的Ⅲ～Ⅳ级星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、恶性间变性星形细胞瘤或少枝胶质瘤、髓母细胞瘤等，生存时间约为1年，且多在治疗后数月复发，治疗上应采用综合疗法，包括手术切除、放射治疗及化学治疗等，疗效很难令人满意.是一种常见的危害人类健康的疾病，是目前神经外科的难题和医学研究的重要课题之一。因此，寻找胶质瘤预后标志物对患者进行预后分析，以提高胶质瘤患者的术后生活质量，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决研究任务。

circRNA是一类广泛且多样地存在于哺乳动物细胞中、具有调控基因表达作用的内源性非编码RNA分子，具有共价闭合的环形结构，广泛存在于各种细胞中，也是继microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究热点。近年来，随着深度测序技术的广泛应用和生物物理和信息学技术的快速发展，人们发现人类许多外显子的转录本可被非线性地反向剪接或通过基因重排而形成circRNA，且它们在所有剪接转录本中占了相当大的比例，并具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特征，有作为诸多疾病分子标志物的潜力。

发明内容

本发明的目的是提供检测CircRNA标志物circ19:5604583|5604936在脑组织中表达量的试剂在制备胶质瘤预后制剂中的应用，CircRNA标志物序列如SEQ NO:1所示。

所述的检测脑组织中circ19:5604583|5604936表达量的试剂为实时荧光定量PCR检测试剂。

所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括进行实时荧光定量PCR的特异性引物，序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的实时荧光定量PCR检测试剂为试剂盒，

所述的试剂盒，除circ19:5604583|5604936的引物外，还含有从脑组织中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。包括：

(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；

(2)以总RNA为模板将circ19:5604583|5604936逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及circ19:5604583|5604936所用随机引物；

(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括circRNAcirc19:5604583|5604936实时荧光定量PCR特异性引物、GAPDH内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。

申请人通过荧光定量PCR与生存曲线分析发现胶质瘤组织来源的circRNA circ19:5604583|5604936与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高。此法为胶质瘤的预后分析提供了强有力的技术支持，有助于提高胶质瘤患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义和推广性。

附图说明

图1为实时荧光定量PCR分析circ19:5604583|5604936在正常脑组织与胶质瘤中的表达差异；

图2为生存曲线分析胶质瘤组织来源的circ19:5604583|5604936表达高低对胶质瘤患者的预后影响。

具体实施方式

以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。

实施例1制备检测circRNA circ19:5604583|5604936表达量的试剂用于制备胶质瘤患者预后的试剂盒(50次反应)

1.RNA稳定溶液50ml

2.异丙醇100ml

3.三氯甲烷100ml

4.Trizol 50ml

5.无酶水10ml

6. 1μM随机逆转录引物50μl

7. 5×逆转录缓冲液200ml