[发明专利]一种可用于“细胞因子风暴”监测的细胞因子组合及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测细胞因子风暴的指标组合，特别是涉及通过固相芯片/液相芯片/ELISA试剂盒法进行检测，属于生物诊断领域。

背景技术

在很多疾病中，包括流感、败血症或者免疫治疗的部分病例中，可能出现一类特殊的临床综合症，即伴随发热、低血压、缺氧和体液中多种细胞因子迅速大量产生，这一系列临床与实验症状称作细胞因子释放综合征，也被称之为细胞因子风暴(cytokine storm)。

细胞因子风暴相关的细胞因子是免疫细胞在被激活、与靶细胞相互作用的时候释放的。相关的细胞因子(白介素、干扰素等)主要来源于激活的免疫细胞，而且又重新作用于免疫细胞的激活(包括T-细胞，单核细胞和巨噬细胞等), 触发急性炎症反应诱导上皮及组织损伤，导致微血管渗漏、心衰甚至死亡。多种细胞因子迅速大量产生的现象，也是引起急性呼吸窘迫综合症和多器官衰竭的重要原因。在发生严重副作用之前检测患者血清样本中细胞因子风暴相关细胞因子，对临床诊断和治疗有重要指导意义。

根据研究文献，部分细胞因子水平等在血清中的增高与患者发生细胞因子风暴具有明确的相关性。如：Garfall A L等人对患者血清中的IL-6、IFN-γ、 Ferritin水平进行检测，评估其发生细胞因子风暴的可能性。然而，3个指标甚至是单个相关指标的检测只能反映细胞因子风暴的某个方面，缺乏全面性，并不能准确监测细胞因子风暴。

Liu L等人为了检测病人的免疫反应，对流感病毒感染患者血清样本中的 507种细胞因子进行广谱检测，发现102种细胞因子在患者样本中有超过2倍的上调。检测免疫相关的大量细胞因子水平是监测细胞因子风暴的一种途径，然而这种“撒网式”的方法并不具备聚焦性，同时也增加了检测费用。

虽然有研究人员通过细胞因子风暴相关的少数几个细胞因子进行联合诊断，但是由于检测指标只有两三个，数量较少，影响了诊断分析的全面性。目前尚没有综合的、聚焦性的细胞因子风暴监测指标组合，因此亟待开发能用于细胞因子风暴监测的指标组合及检测方法。近年来，高通量的蛋白芯片技术日趋成熟，在疾病诊断等方面发挥着重要作用。该技术可以进行细胞因子风暴相关指标组合的检测，提前预判患者细胞因子风暴的发生，监护患者的毒性反应，改善预后，有显著的临床应用价值。

发明内容

基于此，有必要针对细胞因子风暴监测问题，提供一种能用于细胞因子风暴监测的方法。本发明是针对目前尚无用于“细胞因子风暴”监测的指标组合而提出的9个细胞因子组合及检测方法，其中指标IFN-γ、TNF-α、IL-2R、IL-6、 IL-10、GM-CSF在细胞因子风暴研究中被频繁检测，极具代表性。指标MIP-1 α、MIP-1β、CRP在患者样本中也有明显调变，可作为检测的辅助指标。通过检测血清样本细胞因子风暴相关的9种指标(IFN-γ、TNF-α、IL-2R、IL-6、 IL-10、GM-CSF、CRP、MIP-1α、MIP-1β)可以评估细胞因子风暴发生的风险。即通过测定患者组和对照组的细胞因子水平进行联合分析，从而实现早期筛查和诊断。

一种用于检测患者血清中的细胞因子风暴相关的9个指标(IFN-γ、TNF- α、IL-2R、IL-6、IL-10、GM-CSF、CRP、MIP-1α、MIP-1β)，可以通过固相芯片/液相芯片/ELISA试剂盒法检测。以蛋白芯片检测为例：将患者血清与固相芯片/液相芯片进行孵育；加入标记的二抗与目的抗原结合，进行信号示踪；检测荧光信号并读取荧光信号值；结合标准曲线进行细胞因子定量分析。

上述用于细胞因子风暴监测的细胞因子组合及检测方法的出现，使得细胞因子风暴相关指标的检测标准化。不仅具有细胞因子指标覆盖全面、灵敏度高、特异性好等优点，而且多元化的检测方案还有结果稳定、重复性好，效率高等特点。同时，9个高相关性指标的集成，能提高细胞因子风暴诊断的准确性。对于该细胞因子组合的检测是一种创新的、无创伤的、准确方便的用于细胞因子风暴监测的临床诊断手段。

本发明有以下优点：

·来源于文献报道的9个细胞因子风暴指标组合；

·检测指标常见，ELISA试剂盒购买使用方便；

·固相芯片和液相芯片通过双抗夹心&荧光检测法有效检测微量指标，下限达pg/mL；

·固相芯片和液相芯片检测通量高，可同时进行多样本的9个指标同步检测，有效避免采用传统方法所引入的批次间实验误差；

·液相芯片比传统ELISA更加节省成本，50μL的液质样本、200μg的总蛋白量即可完成9个指标的检测；