[发明专利]一种薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物花粉的保存方法，具体涉及一种薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法。

背景技术

薄壳山核桃为世界著名的高档干果、油料树种和材果兼用优良树种。果仁色美味香，无涩味，营养丰富，约含油脂72％，蛋白质11％，碳水化合物13％，含对人体有益的各种氨基酸比油橄榄高，还富含维生素B1、B2，每公斤果仁约有32KJ热量，是理想的保健食品或面包、糖果、冰激凌等食品的添加材料，其果壳易于剥落，利用机械剥壳取仁。其树干通直，材质坚实，纹理细致，富有弹性，不易翘裂，为制做家具的优良材。

薄壳山核桃普遍存在雌雄异熟现象，雌花的可授粉期与雄花的散粉期多不一致。薄壳山核桃的雄花大多在4月底或月初进入开花季节，散粉期基本在5月上旬，集中在6-7天内散粉；雌花则一般在5月初进入开花期，最佳授粉期很短暂，集中在5月下旬，时间约7天左右。品系中大多数为雌先型,雄先型和同时型很少，即雌花的可授粉期与雄花的散粉期很难相遇，小面积的果园可以进行人工辅助授粉，大面积的果园则需科学搭配授粉树。作为一种果用及雌雄异花的树种，高比例的可授花数量和较长花期相遇时间有助于提高产量；但由于作为外来引进树种，受气候等因素较大，薄壳山核桃花期稳定性差，常常在不同年份间的雌雄花花期变化较大，严重影响果实的产量，因此为提高授粉质量和数量，可通过人工授粉干预的方式，有助于改善授粉效果，提高产量。同时花粉作为薄壳山核桃种质的主要形式之一，携带薄壳山核桃全部基因，具有遗传多样性，是种质保存以及杂交育种的重要途径。完成以上工作需要收集足够丰富的花粉，并应保证花粉活力，但在自然条件下薄壳山核桃花粉寿命短，不利于根据花期实时足量地开展种质资源研究和授粉等工作，也为遗传性状研究带来许多困难。因此有必要对薄壳山核桃花粉的长期保存进行研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法，使得冷冻后的花粉保持较好的活力，延长花粉寿命。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法，包括如下步骤：

(1)花序处理：将采集的薄壳山核桃花序置于RH 50％～80％，室温25℃～35℃的恒温环境摊开在硫酸纸上进行散粉，24h～72h后取散落花粉；

(2)脱水：将步骤(1)获得的花粉通过100目筛网后，放在35℃条件下干燥脱水1～9h；

(3)冷冻保存：所述花粉经步骤(2)后迅速放入冻存管内，投放-196℃的液氮中保存；

(4)复苏处理：所述花粉经步骤(3)冷冻保存后，置于37℃恒温水浴解冻2min。

作为如上所述薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法的一种优选方案，步骤(1)中所述花序散粉的环境温度为28℃～30℃，湿度控制在50％～70％，24h～48h后取花粉。

作为如上所述薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法的一种优选方案，步骤(1)中所述花序散粉的环境温度为30℃，湿度控制在50％，24h后取花粉。

作为如上所述薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法的一种优选方案，在步骤(2)中所述花粉置于硫酸纸上进行干燥脱水，时间为2～3h。

本发明中在步骤(3)中所述时间因-196℃液氮超低温保存时代谢活动几乎停止状态，可以用于长期保存。

作为如上所述薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法的一种优选方案，该方法还包括步骤(5)检测：所述花粉经步骤(4)复苏后进行花粉萌发活力检测。

作为如上所述薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法的一种优选方案，所述花粉萌发活力检测中采用的花粉萌发培养基包括：重量百分比计的15％的蔗糖、0.01％的H₃BO₄、0.03％的Ca(NO₄)₂和2％的琼脂糖。

一种用于检测花粉萌发活力的培养基，其包括按重量百分比计的15％(w/v)蔗糖+0.01％(w/v)H₃BO₄+0.03％(w/v)Ca(NO₄)₂+2％(w/v)琼脂糖。

本发明提供一种薄壳山核桃花粉处理及冷冻保存方法，该方法保藏的花粉有效保证花粉活力，克服了薄壳山核桃花期异常和不遇造成的结实率低及杂交育种的时间障碍。