[发明专利]抑制人SRSF3基因表达的反义寡核苷酸序列及其应用

说明书

本发明提供了一种抑制人SRSF3基因表达的反义寡核苷酸序列及其应用。该反义寡核苷酸序列的分子式为：5’‑GTTTCAACAAGCTAGAAATG‑3’，每个反义寡核苷酸的碱基都做了2'‑O‑Methyl和硫代修饰。本发明的反义寡核苷酸抑制SRSF3基因外显子4的外显子剪切抑制子的功能，促进了可变外显子4的剪切，进而减少了全长有功能的SRSF3蛋白的表达，抑制了口腔癌细胞的生长，具有抑制口腔癌的开发和应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域。具体涉及针对癌基因SRSF3的反义寡核苷酸序列及其应用。

背景技术

人的基因序列包括外显子(exon)和内含子(intron)。由RNA聚合酶根据基因模板合成前体信使RNA(mRNA)包括外显子和内含子。内含子必须由剪切复合体(spliceosome)去除并将外显子连接，才能形成成熟的mRNA，并指导蛋白质的合成。前体mRNA中内含子和外显子的剪切并不是一成不变的，可以有多种剪切方式被称为可变剪切(alternativesplicing)。比如：有些外显子可能在剪切时被排除在成熟的mRNA中，称为外显子跳跃(exonskipping)，有些内含子被保留在成熟的mRNA中，称为内含子保留(intron retention)。因此，通过可变剪切的方式，一个基因往往可以产生多种mRNA，并编码多种蛋白质。目前发现超过90％的人类基因的前体mRNA都会发生可变剪切，产生多种mRNA，极大地丰富了基因组的编码能力。

很多研究都发现可变剪切与癌症的发生发展有密切的关系。癌细胞的前体mRNA的可变剪切方式与正常细胞有显著区别¹。细胞中前体mRNA可变剪切的调节主要是可变剪切因子(splicing factor)。SRSF3(又称为SRp20)是一个重要的可变剪切调节因子。我们在2010年发现SRSF3是一个原癌基因²。很多癌组织中都高表达SRSF3；抑制SRSF3的表达导致癌细胞生长受到明显影响，在裸鼠体内成瘤能力也明显下降；在非癌细胞中提高SRSF3的表达水平可以促进细胞生长和在裸鼠体内成瘤。抑制SRSF3的表达可以作为治疗癌症的一种方法。我们在2015年发现人的SRSF3基因有一个可变外显子4。不包含该外显子的mRNA可以编码全长的有功能的SRSF3蛋白。而包含该外显子的mRNA，由于出现了终止密码子，只能编码截短的SRSF3蛋白或经NMD(nonsense-mediated decay)途径降低。因此在癌细胞中包含外显子4的mRNA很少，主要是不包括外显子4的mRNA，有利于全长有功能的SRSF3蛋白的表达。在外显子4的3’端有一个外显子剪切抑制子，能与PTPB1和PTBP2蛋白相互作用，促进了可变外显子4的跳过丢失，进而增加了全长有功能的SRSF3蛋白的表达，有利于癌症的发生和发展³。因此，建立抑制细胞中前体mRNA的SRSF3基因中外显子4在剪切中的跳跃丢失是亟待解决的问题。

反义药物又称反义寡核苷酸药物，是指作为药物使用的，长度为10-30个碱基的人工合成DNA分子及其类似物。根据核苷酸杂交原理，反义药物能与特定基因的mRNA杂交，在转录水平上干扰致病蛋白质的产生过程。蛋白质在人体代谢过程中扮演重要角色，大多数疾病都是由于蛋白质异常引起的，无论肿瘤、心血管疾病或传染性疾病，传统药物主要直接作用于致病蛋白质本身，而反义药物则作用于产生蛋白质的mRNA，因此可广泛应用于各种疾病的治疗，比传统药物更具选择性，而且具有高效低毒、用量少等特点。数年前，由于反义药物合成价格昂贵，使该类药物难以进行广泛的临床试验。近年来，由于合成技术的改进和合成仪器的研制成功，反义药物的成本已大为降低，从而加速了反义药物的研究与开发。

从药动学角度而言，由于体内各器官组织存在核酸酶，因此天然的寡核苷酸进入体内极易被分解失活，故反义药物多以修饰寡核苷酸为主，以增强其抗核酸酶降解的作用。