[发明专利]从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草多糖的方法

说明书

本发明公开一种从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草多糖的方法，依次按照如下步骤进行：将新鲜蛹虫草固体培养基残基干燥成粉用高压均质机破碎制成浆料；按培养基残基粉质量的2%加纤维素酶，在50℃下搅拌酶解3h，然后按培养基残基粉质量2%加果胶酶，常温酶解6h；将酶解液升温至65℃搅拌2h，常温离心，收集上清；按照上清液质量的2%加淀粉酶，于55℃下搅拌酶解6h；按照溶液体积0.8%加入ZTC 1+1天然澄清剂B组分的1%粘胶液，搅拌1h后按体积0.4%加入ZTC 1+1天然澄清剂A组分的1%粘胶液，搅拌1h后，离心，收集上清溶液；醇沉取沉淀；将沉淀溶解后干燥成粉得到虫草多糖。

技术领域

本发明涉及一种从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草多糖的方法，尤其是一种操作简单、得率及纯度高且无污染的从蛹虫草固体培养基残基中提取虫草多糖的方法。

背景技术

蛹虫草，又名北冬虫夏草、北虫草等，为冬虫夏草属（Cordyceps）真菌，可寄生于鳞翅目、鞘翅目、双翅目等昆虫的幼虫或蛹体上。研究显示，蛹虫草有效化学成分的种类及含量与冬虫夏草相同或相似，但与冬虫夏草苛刻的生长条件不同，对生长环境的要求较低，可采用人工发酵培养。蛹虫草培养分为固体发酵培养和液体发酵培养，其中固体培养是采集野生的蛹虫草进行菌种的分离、纯化后接种在大米、小麦或活蚕蛹体等固体培养基上，在一定的温度、湿度和光照条件下培养35～45d得蛹虫草子实体，而蛹虫草固体培养基残基中则含有大量虫草素、粗蛋白、粗多糖、维生素及必需氨基酸等，蛹虫草多糖是蛹虫草固体培养基残基中最重要的活性成分之一。

蛹虫草多糖除是良好的免疫促进剂外，还具有保肝护肝、抗肿瘤、抗氧化、降血糖及抗辐射等作用，目前已有以蛹虫草固体培养基残基为原料提取蛹虫草多糖的相关报道。如中国专利号为201110086808.2的发明专利公开了一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，中国专利号为201410002259.X的发明专利公开了一种从废弃蛹虫草培养基质中提取虫草基质多糖的方法及其提取物的应用。所述专利均采用酶解法对培养基中的蛹虫草粗多糖进行温和提取，但在除去蛋白时却采用了不同的方法。

中国专利号为201110086808.2的发明专利采用如下两种方法：

a. 所述沉淀状蛹虫草粗多糖配置成2～10％的溶液，在4℃条件下缓慢加入10％三氯乙酸溶液，体积比为5：1，搅拌；在4℃条件下振摇10 分钟后，在4℃条件下高速离心10分钟，取上清液重复以上脱蛋白步骤数次，至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量为0.5％；而后向溶液中加入4.5 倍体积95％的乙醇醇沉12～16小时，高速离心，取沉淀，配成3～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da～8000Da 的透析袋内透析48～72 小时，透析后，袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖；

b. 所述沉淀状虫草粗多糖配置成2～10％的溶液，加入溶液重量的0.05～1％的胃蛋白酶，用6mol/L 的HCl 调pH 1.5 ～ 3.0，在37℃条件下酶解1～6 小时；而后于90 ～98℃灭酶10分钟，冷却至室温，用NaOH 溶液调至中性，离心10 分钟，取上清液，加入3～4.5倍体积95％乙醇，在0～4℃的温度下，醇沉12～16 小时；离心，取沉淀，配制成2～5％的溶液，以体积比为4～5 ：1 的比例加入氯仿与正丁醇体积比为4～5：1的Sevag 试剂，剧烈振摇20分钟，静置30 分钟，离心除去沉淀，取上清液重复以上脱蛋白步骤数次，至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量至0.5％ ；而后向溶液中加入4.5 倍体积95％的乙醇醇沉12～16 小时，高速离心，取沉淀，配成2～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da 的透析袋内透析48～72小时，透析后，袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖。

中国专利号为201410002259.X的发明专利则采用如下方法：

3）……随即加入一定量的蛋白酶，调节到适宜的pH值后，40~60℃继续酶解1~3小时；

4）醇沉