[发明专利]微环DNA表达连接人与动物靶细胞与效应细胞的桥接分子及其应用

说明书

本申请涉及微环DNA表达连接人与动物靶细胞与效应细胞的桥接分子及其应用。具体涉及一种用于在体内表达人‑动物交叉反应性双特异性抗体(crBsAb)的微环DNA载体。人‑动物双特异性抗体(crBsAb)能够结合人或动物的靶细胞，也能够结合人或动物的效应细胞(T细胞或NK细胞)，用于癌症、感染、及其它疾病的治疗。在药物临床试验前，人‑动物交叉反应性双特异性抗体有利于借助动物模型评价双特异性抗体类药物的安全性与有效性，以促进药物的开发进程。因为，本发明使用于大动物实验与临床上用于人的微环DNA‑基因药完全一样，避免现在常见的使用大动物与人两个不同版本的生物药造成结果解说上的困难。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种微环(Minicircle,MC)DNA载体，更具体为一种用于在体内表达人-动物交叉反应性双特异性抗体(Bispecific antibody cross-reactive between human and animal，crBsAb)的微环DNA载体。

背景技术

双特异性抗体(Bispecific antibody，简称BsAb)是基因工程抗体的一种，是一类具有双功能的抗体杂交分子，两价抗体中的可变结构域(或者Fab段)分别具有不同的特异性，能够与两种不同的配体结合。研究人员在设计BsAb分子时，考虑到BsAb能够与靶细胞上的抗原分子结合，又可以与效应细胞上的功能分子结合。这样，BsAb分子就在靶细胞(抗原分子)和效应细胞(功能分子)之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应。抗肿瘤和抗免疫活性细胞(比如T细胞或NK细胞)的双特异性抗体，不仅具有激活免疫活性细胞的作用，而且可以通过抗肿瘤的Fab段特异性结合肿瘤细胞而发挥作用，提高局部免疫活性细胞的浓度，增强效应分子杀伤肿瘤的能力。BsAb现已成为抗体工程领域的研究热点，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景，是未来抗体药物市场的发展方向。

目前双特异性抗体BsAb的制备主要包括三种方法：化学偶联法、杂交-杂交瘤法、基因工程抗体制备法。其中基因工程的方法是目前最常用和最先进的工艺技术。微环DNA载体表达方法属于基因工程制备法。利用微环DNA载体可以表达微环双特异性抗体MC.BsAb，所表达的双特异性抗体可以连接靶细胞与T细胞或NK细胞，并触发T细胞或NK细胞杀灭靶细胞。与该发明最接近的相关技术是我们之前发明的微环DNA载体表达双特异性抗体的技术MC.BsAb(CN201710245146.6)。

在药物临床前研究中，动物模型的相关试验是必不可少的。猴和鼠类模型是常见的模式动物，常用来评价药物临床前的安全性与有效性。目前研发中的双特异性抗体大多是人化或人源化的，仅对来源于人的抗原具有特异性的，与猴或鼠类的抗原无交叉反应，难以利用猴或鼠类评估其安全性与有效性。相反，少数只对猴与鼠类有效的抗体，实验结果也不一定等同于人。然而，本发明解决了这个难题，因为存在人-动物的交叉反应，只一个版本的微环基因药就能够同时用于动物实验、人的临床试验和上市的产品，避免了不同版本的生物药可能存在的差异及潜在的安全隐忧。由此可见，开发一种人-动物交叉反应性双特异性抗体(Bispecific antibody cross-reactive between human and animal，crBsAb)，有利于借助动物模型(如猴或鼠类)评价双特异性抗体类药物的安全性与有效性，以促进药物的开发进程，是一个重要的进步。

发明内容

本发明提供一种表达人-动物交叉反应性靶细胞-效应细胞桥接分子(Bridgebetween target cell and effector cell of both human and animals，crBTEC)的重组基因载体，所述桥接分子包含：与靶细胞作用靶点特异性结合的部分A，和与效应细胞作用靶点特异性结合的部分B。

在一个实施方案中，所述重组基因载体选自非病毒基因载体。优选的，所述重组基因载体选自微环DNA载体。其中，所述桥接分子选自蛋白或多肽。优选的，所述桥接分子选自双特异性抗体。其中，所述动物选自猴或鼠类。优选的，所述猴选自食蟹猴，鼠类选自大鼠或小鼠。