[发明专利]一种酿酒酵母乙醇耐受性的评价方法

权利要求书

1.一种酿酒酵母乙醇耐受性的评价方法，包括以下步骤：

⑴收集对数生长期的酿酒酵母悬浮液40mL，均分到两个50mL的离心管中离心，分别得到菌体沉淀A、菌体沉淀B；

⑵所述菌体沉淀A和所述菌体沉淀B分别采用20~40mL无菌水清洗后再次离心，得到清洗后的菌体沉淀A、清洗后的菌体沉淀B；

⑶在所述清洗后的菌体沉淀A中加入20~40mL无菌水，混合均匀后倒入50mL无菌锥形瓶A，经振荡处理得到无菌水处理的酵母菌液；该无菌水处理的酵母菌液采用无菌水分别稀释成20%、40%、60%、80%、100%体积浓度的酵母菌液，并测定600nm处OD值，记为OD_x；所述振荡处理的条件是指温度为28~30℃、速率为150~200rpm、时间为3~4h；

⑷在所述清洗后的菌体沉淀B中加入20~40mL体积浓度为8~18%的乙醇水溶液，混合均匀后倒入50mL无菌锥形瓶B，经振荡处理得到乙醇水溶液处理的酵母菌液，并测定600nm处该乙醇水溶液处理的酵母菌液OD值，记为OD_e；所述振荡处理的条件是指温度为28~30℃、速率为150~200rpm、时间为3~4h；

⑸将200~1000μL所述乙醇水溶液处理的酵母菌液接种到20mL YPD培养基中，经振荡培养后测定OD值，记为OD_p；所述振荡培养的条件是指温度为28~30℃、速率为150~200rpm、时间为10~20h；

⑹将200~1000μL所述步骤⑶稀释后的酵母菌液接种到20mL YPD培养基中，经振荡培养后测定OD值，记为OD_y；所述振荡培养的条件是指温度为28~30℃、速率为150~200rpm、时间为10~20h；

⑺以OD_x为横坐标，OD_y为纵坐标，在excel表格中绘制散点图，拟合得到y=ax+b的公式，其中a、b为拟合公式中的已知参数；

⑻OD_p作为公式中的y值，代入y=ax+b后，得到x值；

⑼将x/OD_e的值定义为酿酒酵母经乙醇水溶液处理后的耐受值；

当x/OD_e=1时，表示酵母生长或存活不受乙醇水溶液影响，耐受度为100%；当x/OD_e=0时，表示酵母全部死亡，耐受度为0；当0x/OD_e1，比值越靠近1表示酵母乙醇耐受性越大；当1x/OD_e≤1.1表示实验结果有误差，但在允许范围之内。

2.如权利要求1所述的一种酿酒酵母乙醇耐受性的评价方法，其特征在于：所述步骤⑴和所述步骤⑵中离心的条件是指速率为4000~5000rpm/min，时间为3~5min。