[发明专利]前列腺癌特异性外泌体、lncRNA及其制备方法和应用有效
| 申请号: | 201711009895.5 | 申请日: | 2017-10-25 |
| 公开(公告)号: | CN107828779B | 公开(公告)日: | 2020-04-21 |
| 发明(设计)人: | 汪付兵;王宇慧;陈浩 | 申请(专利权)人: | 武汉大学 |
| 主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12N15/11;C12Q1/6886;G01N33/574;G01N33/543 |
| 代理公司: | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人: | 余晓雪;王敏锋 |
| 地址: | 430072 湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 前列腺癌 特异性 外泌体 lncrna 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种非疾病的诊断或治疗为目的的前列腺癌外泌体中的长链非编码RNA SAP30L-AS1和SChLAP1表达量的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:1)外泌体RNA的提取;2)外泌体RNA反转录合成cDNA;3)长链非编码RNA SAP30L-AS1和SChLAP1的扩增:反转录的cDNA为模板分别进行实时荧光定量PCR扩增获得长链非编码RNA SAP30L-AS1和SChLAP1。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述实时荧光定量PCR的扩增引物为:
SAP30L-AS1正向引物:5’-TGAATGGGCTCACCTGTTCC-3’
SAP30L-AS1反向引物:5’- AGGTCCGGAAGGGAGACTTT-3’
SChLAP1正向引物:5’- TGGACACAATTTCAAGTCCTCA-3’
SChLAP1反向引物:5’- CATGGTGAAAGTGCCTTATACA-3’。
3.权利要求1检测前列腺癌外泌体中的长链非编码RNA SAP30L-AS1和SChLAP1表达量的试剂在制备用于前列腺癌诊断试剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述检测长链非编码RNA SAP30L-AS1和SChLAP1表达量的试剂为实时荧光定量PCR检测试剂。
5.一种前列腺癌诊断试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括双抗体偶联免疫磁珠和权利要求2所述的实时荧光定量PCR的扩增引物;
所述双抗体偶联免疫磁珠的制备包括以下步骤:取磁珠用磷酸盐缓冲液清洗后,用磷酸盐缓冲液重悬得到悬液;向悬液中加入EpCAM和PSMA抗体进行孵育;孵育后用磁力架分离磁珠,用磷酸盐缓冲液进行清洗,分离的磁珠用磷酸盐缓冲液重悬得到悬浮液备用;用磁力架分离悬浮液得到双抗体偶联免疫磁珠。
6.根据权利要求5所述的前列腺癌诊断试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒还包括总外泌体提取试剂、逆转录试剂和RT-qPCR试剂。
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