[发明专利]一种低共熔溶剂/盐双水相萃取分离锁阳多糖的方法

说明书

本发明公开了一种低共熔溶剂/盐双水相萃取分离锁阳多糖的方法，其主要步骤为：向锁阳粉末中加入一定含水量的低共熔溶剂，室温充分浸提后，冰浴条件下，超声波脉冲进行处理，离心收集上清液，得到锁阳多糖粗提液；将锁阳多糖粗提液中加入磷酸氢二钾，混合溶解，静置，离心，形成双水相萃取体系；其中上相为低共熔溶剂，下相为含糖和磷酸氢二钾的溶液；将上相经冷冻干燥回收；下相经透析处理、冷冻干燥得到锁阳多糖。本方法所采用的低共熔溶剂具有无毒性、生物降解性、生物相容性好和熔点低的优点，提取及分离纯化操作简单、条件温和，分离效率高，锁阳多糖的得率高，低共熔溶剂可回收利用，有效降低了生产成本，适合于工业化规模生产。

技术领域

本领域涉及天然产物深加工技术领域，尤其是涉及一种低共熔溶剂/盐双水相萃取分离锁阳多糖的方法。

背景技术

锁阳（学名：Cynomorium songaricum Rupr.），锁阳科、锁阳属多年生肉质寄生草本，无叶绿素，全株红棕色，大部分埋于沙中，主要分布于我国西北地区，作为中、蒙药中常用药材之一，具有提高免疫、预防疾病和抗癌等多种功效；锁阳含有多种化学成分和药效成分；锁阳多糖作为最重要活性成分之一，是由多个单糖分子脱水缩合形成的天然大分子化合物，是除核酸、蛋白质外又一大类传递信息的分子；其具有抗肿瘤、抗氧化和抗凝活性等多种较强的生物学效应。

锁阳多糖的提取方法有水溶醇沉法、稀碱溶液浸提法、超声辅助提取法等，专利文献CN104004108A《一种酶解制备锁阳多糖的方法》和专利文献CN103145863A《酶处理提取锁阳多糖的方法及锁阳多糖抗肿瘤制剂的制备》均采用酶辅助提取锁阳多糖；专利文献CN101580553《一种锁阳多糖的制备方法》采用超声结合微波方法提取锁阳多糖；上述方法结合sevage法除蛋白质、乙醇沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和吸附层析等方法中一种或多种对锁阳多糖进行纯化。但这些提取和纯化方法存在得率较低、试剂消耗量大、能耗高、价格昂贵、操作步骤繁琐等缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种低共熔溶剂/盐双水相萃取分离锁阳多糖的方法，以解决现有技术提取锁阳多糖存在得率较低、试剂消耗量大、能耗高、价格昂贵、操作步骤繁琐等问题。

一种低共熔溶剂/盐双水相萃取分离锁阳多糖的方法，本方法所用锁阳原材料为甘肃产的经过除脂自然晾晒干燥后的锁阳粉末，它包括以下步骤：

步骤一、锁阳多糖粗提液的制备：在锁阳粉末中加入含水量的体积百分比为(30-50)%低共熔溶剂，锁阳粉末与低共熔溶剂质量体积比为1: (20-40)(m/V)，充分混匀，在0-4℃冰浴条件下进行超声波处理，超声波的功率为200-400W，脉冲工作方式为超声2s，间歇2s，超声时间为30-50，然后进行离心5-10分钟，离心转速为每分钟2000-4000转，取上清液，得到锁阳多糖粗提液；

步骤二、双水相萃取：在步骤一制备的锁阳多糖粗提液中加入磷酸氢二钾充分混匀，磷酸氢二钾和锁阳多糖粗提液的质量体积比为(3-6):10(m/V)，待磷酸氢二钾完全溶解后，静置60-100分钟，再将溶液离心10-20分钟，离心转速为每分钟2000-4000转，形成双水相萃取体系；

步骤三、回收低共熔溶剂和多糖：取步骤二所制备的双水相萃取后的上相，经冷冻干燥至恒重的粘性液体状态，得到低共熔溶剂，回收低共熔溶剂；取下相，并经透析除磷酸氢二钾，所用透析袋分子截留量为8000-12000Da，冷冻干燥得到锁阳多糖。

优选的，所述低共熔溶剂的制备方法为：季铵盐与氢键供体按照摩尔比为1:（1-3）的比例混合，常压，温度为80-100℃搅拌加热1-3h至透明无色溶液，冷却至室温即可得到低共熔溶剂；低共熔溶剂中季铵盐与氢键供体之间以氢键连接，能够提高多糖得率。

所述季铵盐为氯化胆碱，氢键供体为乳酸、甘油、苹果酸、琥珀酸或酒石酸中的一种。