[发明专利]用于多型人乳头瘤病毒检测的单克隆抗体

说明书

本发明涉及用于多型人乳头瘤病毒检测的单克隆抗体。具体而言，本发明首先提供一种分离的多肽，选自：(1)SEQ ID NO:1；(2)SEQ ID NO:1长至少12～21个氨基酸残基的片段；(3)在(1)和(2)所示序列的N端和/或C端具有1个半胱氨酸残基的序列；和(4)(1)～(3)所述序列与抗体制备或检测中用到的载体蛋白形成的融合蛋白。本发明还提供与所述多肽特异性结合的抗体及抗体组合。使用本发明的抗体组合能够检测多型HPV。

技术领域

本发明涉及用于多型人乳头瘤病毒检测的单克隆抗体。

背景技术

1933年人类首次发现乳头瘤病毒，1978年，第一例生殖道HPV被鉴定。目前，根据HPV DNA序列表达基因不同，已确定的HPV亚型超过200种，其中，85种HPV的基因克隆被鉴定，另有120种的部分基因型被鉴定，并且有30余种是从生殖道组织中分离得到。

根据HPV感染的部位，分为皮肤型和粘膜型；根据其致病性的大小，分为高危型(High risk，HR)和低危型(Lower risk，LR)。高危型主要有HPV16、18、33、31、58和52等，与宫颈癌的发病有关；低危型主要有HPV6、11、42和44等，与生殖道疣状物有关。

HPV作为宫颈癌发生的重要致病因素目前已经十分明确，充分利用流行学调查的结果，对制定宫颈HPV感染预防性筛查策略，对指导筛查试剂盒的研制均有重要意义。HPV筛查作为降低宫颈癌发生的重要手段目前是以分子生物学检测占据主导地位，而且也是目前唯一获得临床使用许可的HPV检测方法。总结现今HPV检测的研发方向，仍然以分型检测为主，尤其是专注于如何区分更多的型别。但是，目前的检测和研究还存在一些问题，比如：分型检测型别覆盖的问题，“低危”HPV感染是否可以忽略的问题，多型别交替感染与多重感染的问题，HPV感染易感个体的问题，机体免疫状态与HPV感染的问题，等等。全面厘清上述这些问题，对调整HPV预防性筛查试剂盒的研发策略肯定具有重要的帮助。

进行HPV分型检测的最大目的是区分HPV感染者是HR-HPV还是LR-HPV感染，以此确定宫颈癌的高危人群。近年的流行病调查结果显示，LR-HPV引起肿瘤的可能性应当引起重视。de Sanjose S等收集了38个国家的浸润性宫颈癌石蜡标本进行HPV DNA分析检测。在10575例浸润癌标本中8977例(85％)检出HPV DNA阳性，共鉴定出30个型别。最常见的型别分别是HPV16，18，31，33，35，45，52和58型，总共有8196例(91％，95％CI：90～92)。16例标本仅为单一LR-HPV感染，其中HPV6型9例，HPV11型2例，HPV42型共3例，HPV44和HPV74各1例，占宫颈癌总数的0.18％。Correnti M等对150例委内瑞拉妇女的宫颈癌标本进行28个型别HPV分型检测。在148例DNA阳性标本中，135例HR-HPV感染(91.2％)，1例确定为LR-HPV11感染，占0.7％。与上述结果类似，Alemany L等收集1940～2007年间西班牙816例宫颈鳞状细胞癌标本进行了25个HPV型别的分型检测。结果7例为LR-HPV单一感染，其中3例HPV30，2例HPV6和2例HPV26，分别占阳性检出的0.4％，0.2％和0.2％。以上研究结果表明，单一的LR-HPV感染有可能是宫颈癌发生的唯一病原学因素。

以下的两项研究中LR-HPV在宫颈癌中的检出率更高。Alsbeih G等收集沙特阿拉伯100个石蜡包埋的宫颈癌标本，采用Linear Array kit技术进行了HPV分型检测。结果89例检测出HPV阳性，11个不同型别得到了确定。其中两例为单一LR-HPV感染，分别为HPV6、HPV64，占2％。Alibegashvili T等收集了91例格鲁吉亚妇女的浸润癌标本进行分型检测。先用GP5+/GP6+PCR扩增，阳性产物采用反向线性杂交法进行HPV分型检测，可以鉴定44个HPV型别。结果HPV的检出率为100％，其中2例为单纯LR-HPV阳性，分别为HPV30、HPV42，占2.2％。综上所示，多个研究均发现，宫颈癌标本中低危型HPV可以作为唯一被检出的感染因素，因此不排除低危型别HPV致癌可能性。