[发明专利]一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的RT-PCR引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的RT‑PCR引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用。所述的引物组由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明还提出了一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的荧光定量RT‑PCR试剂盒，含有所述的引物组以及Eva Green荧光染料反应液。本发明与现有技术相比，最大的优势在于能够区分猫传染性腹膜炎病毒感染以及猫冠状病毒感染，且检测灵敏度高，特异性好，能够实现现有检测技术所无法完成的定量、快速、特异、敏感的结果判定，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种病毒检测引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用，特别涉及一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用。本发明属于病毒检测技术领域。

背景技术

猫传染腹膜炎(Feline infectious peritonitis，FIP)主要由猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus，FIPV)引起的猫科动物的渐进性、致死性疾患，主要以腹膜炎、大量腹水聚集(渗出型)或各种脏器出现肉芽肿病变(肉芽肿型)为临床特征，危害严重，是影响养猫业发展的主要病毒性传染病之一。

目前国内临床诊断工的方法包括病理学检查、血清学检测和RT-PCR检测等。仅通过临床症状进行诊断的方法，需要依赖于临床症状的表现以及诊断者的经验，而患传染性腹膜炎的猫初期症状不明显，病程进展有较大差异，导致获得的结果容易不准确，往往因误诊而贻误治疗最终导致病猫死亡。现有的常规方法是抽取腹腔液提取后进行检测，这种方法本身的敏感性极低，而同时由于FIPV在腹腔液中含量极少，非常容易导致漏检，从而不能准确检测出FIPV。目前已有猫传染性腹膜炎病毒的RT-PCR检测方法发表，但其引物并非检测猫传染性腹膜炎病毒的特异性引物，而是适用于通用猫冠状病毒。传统方法中往往难以区分猫传染性腹膜炎与猫肠道冠状病毒。

因此，急需建立一种能够区分猫传染性腹膜炎与猫肠道冠状病毒的RT-PCR检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的RT-PCR引物组，含有该引物组的试剂盒，以及建立一种能够特异、灵敏的检测猫传染性腹膜炎病毒以及猫肠道冠状病毒的检测方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明发明人将猫传染性腹膜炎和猫肠道冠状病毒的特异性N基因序列进行DNAMAN比对，选择出一段高特异性序列进行引物设计。实验表明，本发明的引物有很好的特异性，可以明显区分猫传染性腹膜炎与猫肠道冠状病毒。能够实现现有检测技术所无法完成的快速、特异、敏感的结果判定，显著提高了对猫传染性腹膜炎病毒的检测效率及其敏感性，利用该方法作为中间结果的效率、准确性和可靠性高，通过添加荧光基团实时监测扩增反应过程，还可以通过制作标准曲线得到定量检测结果。本发明的检测方法和检测试剂盒具有使用方便、检测效率高、节约成本、检测范围大、速度快、通量高、封闭检测无污染、灵敏度高等优势，为尽早发现和有效防控猫传染性腹膜炎病毒提供了新的技术手段。

在上述研究的基础上，本发明提出了一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的RT-PCR引物组，由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步的，本发明还提出了所述的RT-PCR引物组在制备检测猫传染性腹膜炎病毒试剂中的用途。

其中，优选的，所述的试剂用于区分猫传染性腹膜炎病毒感染以及猫冠状病毒感染。

更进一步的，本发明还提出了一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的荧光定量RT-PCR试剂盒，其中含有本发明所述的引物组以及Eva Green荧光染料反应液。