[发明专利]一种基于液液萃取-液相色谱-串联质谱同时测定植物油脂中黄曲霉毒素和香味剂的方法

权利要求书

1.一种基于液液萃取-液相色谱-串联质谱同时测定植物油脂中黄曲霉毒素和香味剂的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)液液萃取：向待测油脂和空白油脂样品中加入提取溶剂，涡旋震荡、超声和离心，得到上层清液，待净化；

(2)液液分配净化：在上层清液中添加净化熔剂，涡旋振荡，离心后，取下层清液，过微孔滤膜，得待测液和空白基质提取液；

(3)标准溶液配制：首先，将质量比为1的香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素用甲醇溶解并定容，得1.0mg/mL标准储备液，再用乙腈稀释至1.0mg/L混合标准储备液1；

分别配制浓度为0.1mg/L的黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1和AFM2标准溶液，为混合标准储备液2；

分别吸取混合标准储备液1和混合标准储备液2，混合；再用空白基质提取液稀释至含香兰素分别为10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL，含黄曲霉毒素AFB1分别为0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的混合标准系列工作溶液；

(4)定性定量分析：将步骤(2)得到的待测液进入液相色谱-串联质谱仪，采用多反应监测正模式监测，外标法定量；

a)定性分析：利用LC-MS/MS法测定试样和建立标准工作曲线，若待测液中检出的色谱峰的保留时间与相应标准物质色谱峰的保留时间一致，允许偏差小于2.5％；再进一步比较待测样品和标准工作液中浓度接近的各组分定性离子的丰度，偏差不超过表1规定的范围，则判定油脂样品中存在对应的待测样品；

表1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度	＞50％	20％-50％	10％-20％	≦10％
允许的最大偏差	20％	25％	30％	50％

b)定量分析：利用LC-MS/MS法测定混合标准系列工作溶液，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以混合标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；再以相同条件测定待测样品，得到待测样品的色谱峰面积，根据标准工作曲线得到待测液中各组分的浓度；待测样品中各待测组分的响应值在标准工作曲线的线性响应范围内，如果含量超出范围，则重新取待测样品分析，然后用乙腈稀释到适当浓度后分析；

⑸结果计算：

计算公式：

式(1)中：

X—油脂样品中待测组分的含量，单位为μg/kg；

c—从标准工作曲线中读出的待测样品中各待测组分的浓度，单位为μg/L；

m—油脂样品称取的质量，单位为g；

V—油脂样品溶液定容体积，单位为mL；

所述的液相色谱-串联质谱法测试条件如下：

所述的LC-MS/MS的色谱条件如下：

色谱柱：Agilent XDB C18反相柱，色谱柱规格4.6×50mm，2.7μm；

流动相：A相：水溶液，含0.1％甲酸，B相：甲醇；

梯度洗脱时间：12min；

梯度洗脱程序：0→0.5min，75％A相；0.5→2min，75％→50％A相；2→6min，50％A相；6→7min，50％→10％A相；7→9min，10％A相；9→12min，10％→75％A相；

流速：0.3mL/min；

进样量：2μL；

色谱柱温度：30℃；

所述的LC-MS/MS的质谱条件如下：

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：正离子扫描；

检测方式：多反应监测；

离子化电压：5500V；

雾化气：50-60psi

辅助气：50-60psi

气帘气压力：35psi；

雾化温度：500-550℃。