[发明专利]草鱼抗疲劳活性肽的用途

权利要求书

1.草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途。

2.根据权利要求1所述的草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于：所述的活性肽的制备方法包括以下步骤：

1）浸泡去腥：将草鱼鱼肉用清水洗净，浸泡于去腥液中1~4h，沥干；

2）分步酶解：在草鱼鱼肉中加入蒸馏水匀浆，将匀浆液置于25~40℃的恒温环境中，加入胰蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶，加入枯草芽孢杆菌中性蛋白酶和活性短肽酶解，酶解结束后灭酶，过滤取滤液；

3）等电点沉淀：调节滤液pH为目标蛋白的等电点，静置后离心取沉淀；

4）纳滤：在沉淀中加蒸馏水溶解后置于蒸馏水中浓缩纳滤24~36h；

5）凝胶层析：用蒸馏水将Sephadex G-15凝胶溶胀后装柱，检查柱均匀性后上样，用自动取样器收集洗脱液，在280nm下测紫外吸光度，做曲线；重复上样，根据吸光度曲线收集分离的溶液；上样溶液为纳滤浓缩液用蒸馏水稀释10~20倍得到；

6）高效液相色谱纯化：高效液相色谱分离纯化条件为：色谱柱：1.7 μm BEH C18 色谱柱；流动相：0~5min，水；5~16min，60~70%水，30~40%乙腈；16~30min，40~60%水，40~60%乙腈；30~40min，乙腈；流速：0.7~1.3ml/min，柱温25~35℃，检测波长为254 nm和280 nm，收集主要色谱峰，冻干得到草鱼抗疲劳活性肽。

3.根据权利要求2所述的草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于：所述的去腥液成分及其重量份为：5~10份柠檬酸、10~18份紫苏提取物、0.1~0.3份氯化钠、0.5~0.8份碳酸氢钠、20~30份乙醇和0.2~0.4份维生素E。

4.根据权利要求2所述的草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于：所述的草鱼鱼肉与蒸馏水的质量体积比为1g：5~15ml。

5.根据权利要求2所述的草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于：所述的胰蛋白酶的加入量为匀浆液质量的0.2~0.7%，酶解pH为7.5~9.0，酶解温度为25~40℃，酶解时间为2~4h。

6.根据权利要求2所述的草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于：所述的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的加入量为匀浆液质量的0.1~0.5%，活性短肽的加入量为枯草芽孢杆菌中性蛋白酶质量的1~5%，酶解pH为7.0~7.8，酶解温度为35~50℃，酶解时间为10~30min。

7.根据权利要求2所述的草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于：所述的活性短肽的氨基酸序列为：HSHCVCSGTTHYVLHCVNCSR。

8.根据权利要求2所述的草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于：所述的目标蛋白的等电点为：5.5~6.5。