[发明专利]外膜蛋白VP1243在防治弧菌感染中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及外膜蛋白VP1243在防治弧菌感染中的应用。

背景技术

弧菌为革兰氏阴性杆菌或弯曲杆菌，广泛分布于海洋、河口等各种盐度的水生环境，也可见于人或鱼肠道中。弧菌是最主要的海水养殖动物的病原菌，由病原弧菌引起的感染性疾病在世界各地普遍流行。我国沿海各省海水养殖业发达，但主要养殖品种如大黄鱼、鲈鱼、石斑鱼、牙鲆、大菱鲆、欧洲鳗等均受到弧菌病的严重危害。同时，副溶血弧菌也是也是引起世界范围内肠胃炎的主要病原菌之一，对该菌的研究已引起全世界的关注。

目前，对由病原弧菌引起的感染性疾病的主要控制途径是使用抗生素，但由于长期用药可能引起水产品药物残留和耐药菌的传播问题，目前农业部对抗生素在水产养殖中的使用已有严格的规定，能够应用的种类少之又少。近年来，免疫预防由于其对动物无副作用、对环境的友好特性、预防特定疾病的有效性而备受重视，疫苗在水产动物病害控制中的应用正逐步推广。

外膜蛋白(outer membrane proteins,OMPs)是革兰氏阴性菌外膜的主要成分，约占外膜结构的50％。外膜蛋白直接与外环境接触，在维持外膜结构、物质运输、细胞表面识别和信号转导等方面起重要作用，而且某些外膜蛋白可促进细菌粘附和定植、干扰或逃避宿主的免疫防御作用，是病原菌感染以及致病的关键因素之一。近年来的研究已证实某些外膜蛋白具有良好的免疫保护性，可促进宿主产生免疫防御反应，是极具发展前景的疫苗靶位。利用具有免疫保护性的外膜蛋白研制的亚单位疫苗，有着广阔的发展前景。

因此，筛选鉴定对病原弧菌具有防治作用的外膜蛋白是控制由病原弧菌引起的感染性疾病的良好途径。

发明内容

本申请提供了外膜蛋白VP1243在防治弧菌感染中的应用，该外膜蛋白VP1243不仅具有良好的免疫原性，而且具有优异的免疫保护性，经该外膜蛋白免疫后的动物机体不仅能够产生抗体，而且能够保护动物机体不再被相应的病原细菌感染致病。

本发明中，外膜蛋白VP1243是指具有如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的蛋白。

弧菌感染会导致感染个体或群体罹患弧菌病或弧菌肠炎等疾病，本发明中，所述的弧菌病是指由能够表达所述外膜蛋白VP1243的病原弧菌引起的鱼类、虾类、贝类等海水养殖动物病变。所述弧菌肠炎主要是指由副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)引起的动物机体病变。所述的动物机体包括海水养殖动物，也包括人类等哺乳动物；人类等哺乳动物感染弧菌肠炎主要表现为食用烹饪不当的海产品或盐腌制品后出现的食物中毒。

一般情况下，只要某病原弧菌能够表达所述外膜蛋白VP1243，那么所述外膜蛋白VP1243即能用于防治该病原弧菌。在目前看来，能够表达所述外膜蛋白VP1243的病原弧菌主要是副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)。

本发明还提供了一种用于防治弧菌感染的亚单位疫苗，该亚单位疫苗由具有如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的外膜蛋白VP1243佐以药学上可接受的佐剂而成。

本发明还提供了一种用于防治弧菌感染的细菌活疫苗，该细菌活疫苗由能表达具有如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的外膜蛋白VP1243的细菌制成。

本发明还提供了包含编码具有如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的外膜蛋白VP1243的基因的表达载体或重组转化子。

本发明还提供了所述的表达载体或重组转化子在制备用于防治弧菌感染的亚单位疫苗中的应用，以及所述的表达载体或重组转化子在制备用于防治弧菌感染的细菌活疫苗中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

外膜蛋白VP1243不仅具有良好的免疫原性，抗血清在稀释5000倍以上仍出现阳性反应；而且具有优异的免疫保护性，感染病原弧菌后免疫小鼠全部存活；经该外膜蛋白免疫后的动物机体不仅能够产生抗体，而且能够保护动物机体不再被相应的病原细菌感染致病；以外膜蛋白VP1243为靶位研制的亚单位疫苗、细菌活疫苗等，对预防和对抗由弧菌感染引起的弧菌病、弧菌肠炎具有重大意义，能够有效减少水产养殖业的损失，保证食品安全和人类健康。

附图说明

图1为PCR扩增副溶血弧菌VP1243基因的电泳检测结果图；

图2为质粒pET32a(+)的双酶切鉴定结果图；

图3为重组质粒pET32a(+)-VP1243的双酶切鉴定结果图；