[发明专利]热处理诱导PML/RARα融合蛋白及其突变体溶性改变和降解

说明书

本发明提供一种诱导PML/RARα融合蛋白及其突变体溶性改变和降解的方法，通过热休克诱导野生型以及砷剂耐药的PML/RARα融合蛋白溶性转变从而促使其降解。本发明方法跟传统的化疗或者三氧化二砷以及全反式维甲酸相比，解决了APL治疗领域的最大难题，既可诱导As₂O₃耐药PML/RARα突变体蛋白的溶性转变从而促使其降解而且副作用较小。另外，联合应用热休克与As₂O₃可以加快APL病人的治疗。本发明提供的方法在诱导野生型以及砷剂耐药的PML/RARα融合蛋白溶性转变从而促使其降解中的应用。

技术领域

本发明属医学领域，具体涉及一种热处理诱导PML/RARα融合蛋白及其三氧化二砷耐药突变体的溶性改变和降解方法，是利用相对温和的热休克诱导PML/RARα融合蛋白溶性改变及降解，从而将此方法用于临床治疗APL病人。

背景技术

急性早幼粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia，APL)是急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia，AML)的一种特殊类型。按FAB标准划分，APL属于AML的M3，约占AML的10％。APL通常伴随染色体易位，即17号染色体上的维甲酸受体α(RARa)基因与其他染色体上的基因相互易位，并由此产生X-RARa融合蛋白和RARa-X融合蛋白。98％以上的APL患者携带t(15；17)，X序列来源于15号染色体上的早幼粒细胞白血病(PML)基因，由此产生的融合基因表达了PML/RARα和RARα-PML融合蛋白。

多种人类白血病都具有特征性的致瘤融合蛋白，它们在疾病的发生发展过程中扮演重要角色，因此这些融合蛋白成为抗癌治疗的潜在靶标。研究表明，PML/RARα融合蛋白驱动APL的发生，因此PML/RARα相应的成为APL治疗的第一靶标。三氧化二砷(As₂O₃)作为治疗APL的有效药物之一，目前公认其能靶向并降解PML/RARα融合蛋白，从而诱导细胞分化。

另有研究表明，单以As₂O₃来治疗初诊的APL病人，疾病复发率或耐药率高达20-30％。砷剂或全反式维甲酸耐药成了临床上治疗APL的一大难题。在正常情况下，砷剂首先改变PML/RARα融合蛋白的溶性(促进其从RIPA裂解液可溶部分转移到不可溶部分)而后促进其蛋白酶体途径的降解。对于砷剂耐药的突变体，其直接表现是抵抗砷剂诱导的溶性改变从而抵抗其蛋白的降解。所以，PML/RARα蛋白的溶性改变对砷剂诱导的降解有着至关重要的作用。有报道提出As₂O₃和热休克可能引起细胞内蛋白聚集体的形成，而这些聚集体可能就是RIPA不可溶的。因此，在本发明专利中，我们试图通过热休克手段引起PML/RARα蛋白溶性转变从而使其降解。

发明内容

本发明的目的是提供一种诱导PML/RARα融合蛋白及其突变体溶性改变和降解的新颖方法，通过热休克诱导野生型以及砷剂耐药的PML/RARα融合蛋白溶性转变从而促使其降解。

本发明方法通过以下步骤实现：

本发明主要通过38～45℃(优选40℃～43℃)的具有流动性的媒介(液态包括水、油、酒精、甲醇、乙醚等；气态包括空气、水蒸气、氧气、氮气等；固态包括沙子、黏土等)处理NB4细胞或者野生型以及砷剂耐药的PML/RARα融合蛋过表达的HeLa细胞1分钟～12小时(优选30分钟～2小时)，从而特异性地诱导APL致病蛋白PML/RARα的溶性转变以及降解。

本发明的另一个目的是提供所述方法在诱导野生型以及砷剂耐药的PML/RARα融合蛋白溶性转变从而促使其降解中的应用。