[发明专利]芘降解功能植物内生细菌PRd5及其应用

说明书

本发明公开了芘降解功能植物内生细菌PRd5，其分类命名为肠杆菌（Enterobacter sp.），保藏编号为CGMCC No.13218，该菌株于2016年10月31日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。本发明还公开了利用芘降解功能植物内生细菌PRd5定殖于植物体内以降低芘对植物和环境中的污染的应用。芘降解功能植物内生细菌PRd5能高效降解环境中的芘，并可以通过浸种、和/或灌根+涂叶的方法定殖到植物体内，降低植物体内与种植环境中的芘污染（芘污染浓度可达100 mg·kg^‑1），确保农产品安全，改善环境质量。

技术领域

本发明属于污染环境微生物修复领域，具体涉及了一株芘降解功能植物内生细菌PRd5及其应用。

背景技术

植物可以从大气、水和土壤中积累对身体健康有害的多环芳烃污染物，并通过食物链富集到人体内，危及人类健康。因此，亟需解决PAHs在农作物体内的积累，保障农产品安全和人类健康。芘作为PAHs中四环污染物的典型代表，由于其环境持久性以及毒性，常被用作测定环境中PAHs污染的指示物和PAHs生物降解的模型分子。

植物内生细菌是一类能定殖于植物健康组织间隙或细胞内，不受外部环境影响，能与宿主植物和谐共生的一类微生物。本实验筛选的功能内生细菌不仅可以调控植物对污染物的吸收同时可以提高植物降解有机污染物的能力。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一株高效芘降解功能植物内生细菌PRd5以及确定其定殖方法和定殖数量。

本发明还要解决的技术问题是提供了上述芘降解功能植物内生细菌PRd5的筛选方法。

本发明还要解决的技术问题是提供了芘降解功能植物内生细菌PRd5在降低芘污染中的应用。

本发明还要解决的技术问题是提供了芘降解功能植物内生细菌PRd5在降低农作物中芘污染的应用，具体是定殖于植物体内以降低植物和种植环境中的芘污染。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：芘降解功能植物内生细菌PRd5，其分类命名为肠杆菌属(Enterobacter sp.)，保藏编号为CGMCC No.13218，该菌株已于2016年10月31日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中国科学院微生物研究所)，邮编：100101。

本发明芘降解功能植物内生细菌PRd5的分离过程为：采集江苏省南京市的扬子石化芳烃厂排污口生长良好的植物体，先将植物表面消毒，研磨液稀释涂布于芘无机盐固体培养基上分离纯化出菌株；挑选有明显降解圈且长势旺盛的菌株对其芘降解能力进行测定，最终筛选出芘降解功能植物内生细菌PRd5。

一株芘降解功能植物内生细菌PRd5的筛选方法，包括以下步骤：将采集的植物样品清洗干净后置于无菌操作台内依次用75％乙醇水溶液漂洗3～5min，再用无菌水冲洗3～4次，0.1％NaClO漂洗2～5min，再用无菌水冲洗至确保植物表面消毒剂被洗干净。将消毒好的植物样品移入LB固体平板中30℃培养72h，检查植物表面是否存在残留的细菌。剪碎消毒好的植物样品，放进含有适量无菌水的灭菌研钵中充分研磨，静置20min，吸取研磨液的上清稀释涂布于制备好的芘无机盐固体培养基上，30℃培养48h，挑取不同形态的、生长良好的单菌落反复划线，纯化分离菌株。挑选有明显降解圈且长势旺盛的菌株对其芘降解能力进行测定，最终筛选出芘降解功能植物内生细菌PRd5。

上述芘降解功能植物内生细菌PRd5通过芘无机盐固体培养基筛选获得。