[发明专利]一种具有高ACE抑制活性的棉籽蛋白多肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种棉籽蛋白ACE抑制肽及其制备方法，尤其涉及一种具有高ACE抑制活性的棉籽蛋白多肽及其制备方法。

背景技术

血管紧张素转换酶(ACE)是广泛存在于人体组织和血浆中的一种含锌二肽羧基肽酶(Dippeptidely Carbononxypeptidase)，其相对分子量为120000-150000。主要存在于血管内皮细胞内，肺毛细血管细胞中含量最为丰富。ACE具有提高血压的作用，抑制ACE的活性有利于治疗高血压。

研究发现，许多天然蛋白水解肽具有ACE抑制活性，称为ACE抑制肽。这些生物活性肽在预防和治疗高血压方面具有很大的潜力。由于食源性ACE抑制肽安全性高，无毒副作用，对正常血压没有过度降压的危险等特殊优点，越来越受到人们的关注。

Plastein反应又称类蛋白反应或塑蛋白反应，是Danilevski和Okuneff于1902年发现的。Plastein反应一般被认为是蛋白酶存在下蛋白质水解反应的逆反应，通常分为水解、浓缩和合成三步进行，是指在一定条件下，蛋白酶催化高浓度的蛋白质水解物或低聚肽的混合物，生成沉淀、触变胶体或具触变性粘稠的胶状类蛋白产物的过程。该反应的机理较为复杂，可能涉及水解反应、浓缩作用、转肽作用、物理聚集中的一种或几种。Plastein反应能够产生原料蛋白质所没有的新肽段，其产物具有与原料蛋白质不同的氨基酸序列，所以Plastein反应可以去除蛋白质水解物的苦味，改善蛋白质的功能性质，提高蛋白质的营养价值，已成为食品工业研究的热点。

研究表明，Plastein反应修饰可以显著提高某些生物活性肽的功效。吴丹等人曾对酪蛋白进行酶水解及Plastein修饰改善其抗氧化性；杨锋等人曾对酪蛋水解物进行类蛋白修饰并初步研究了产物的抗氧化活性。张强等研究发现双孢蘑菇源抗氧化肽修饰产物的抗氧化活性大概是修饰前的4倍。王晗欣等研究发现鹰嘴豆蛋白抗氧化肽修饰产物的还原力和羟自由基清除率都有显著提高。汪敬科等利用类蛋白反应对酪蛋白水解物进行修饰，制备4个不同修饰程度的修饰产物，修饰后其ACE抑制活性也逐渐增加(增加至49％～62％)。朱晓杰等在Plastein反应中添加外源Tyr、Trp、Pro、Leu和Phe，探究外源氨基酸存在下Plastein反应对海地瓜蛋白酶解物ACE抑制活性的影响。结果发现，添加Pro的效果可以显著提高修饰产物的ACE抑制活性。这些研究显示，Plastein反应在改善生物活性肽的活性方面存在着很大的发展空间。但Plastein反应用于改善棉籽蛋白源ACE抑制肽的抗氧化活性的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有高ACE抑制活性的棉籽蛋白多肽及其制备方法。本发明以棉籽蛋白为原料，对棉籽蛋白ACE抑制肽进行Plastein反应修饰，提高了棉籽蛋白抗ACE抑制肽的活性，为天然高效ACE抑制剂的制备提供一种新途径，为棉籽资源的综合开发利用提供依据。

本发明采用的技术方案为：

一种具有高ACE抑制活性的棉籽蛋白多肽，其制备方法为：

(1)脱酚棉籽粕粉按料液比为1：25(g/mL)加入蒸馏水，用1mol/L NaOH溶液调节体系pH值至11.5，在50℃下浸提2h，然后6000r/min离心15min，分离得上清液，用1mol/L的盐酸溶液调节上清液的pH值至等电点4.3，再10000r/min离心15min，得到蛋白质沉淀，经透析、真空冷冻干燥得到棉籽蛋白质干粉；

(2)棉籽蛋白质干粉配成质量分数为5％的棉籽蛋白质溶液，调节pH值至7.5，加入木瓜蛋白酶(30000U/mL，E/S＝1.2％)，43.5℃下水解4h，然后95℃水浴灭酶15min，再加入4ml质量分数为10％的三氯乙酸TCA，10000r/min离心15min(沉降酶蛋白和未酶解的棉籽蛋白质)，收集上清液，真空冷冻干燥得到棉籽蛋白ACE抑制肽；

(3)将棉籽蛋白ACE抑制肽用蒸馏水配制成底物浓度为10％的悬浮液，按酶与底物浓度比为2000.11U/g的比例加入木瓜蛋白酶，再按0.5mol/mol棉籽蛋白ACE抑制肽游离氨基的外源氨基酸比例加入亮氨酸，调节pH值至7.5，30℃恒温水浴5h，95℃水浴灭酶15min，冷却至室温，10000r/min离心15min，收集上清液，真空冷冻干燥，即得。

所述脱酚棉籽粕粉购于中棉紫光生物科技有限公司。