[发明专利]用于检测奶牛三种隐性遗传缺陷病的引物对及其应用

说明书

本发明公开了用于检测奶牛三种隐性遗传缺陷病的引物对及其应用，其中，第一对引物由序列表中SEQ NO.1和SEQ NO.2所示的寡核苷酸序列组成，第二对引物由序列表中SEQ NO.3和SEQ NO.4所示的寡核苷酸序列组成，第二对引物由序列表中SEQ NO.3和SEQ NO.4所示的寡核苷酸序列组成；前述的三对引物可以应用在制备用于诊断CVM、BLAD、DUMPS这三种隐性遗传缺陷病的试剂盒中。本发明的有益之处在于：应用高分辨率熔解曲线技术和本发明提供的三对引物可实现对奶牛的CVM、BLAD、DUMPS这三种隐性遗传缺陷病的基因突变位点进行检测，检测结果与测序法结果一致，并且具有操作简单、快速、高通量的优点。

技术领域

本发明涉及用于检测疾病的引物对及其应用，具体涉及用于检测奶牛脊椎畸形综合征(CVM)、白细胞粘附缺陷病(BLAD)、尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)这三种隐性遗传缺陷病的引物对及其在制备用于诊断奶牛脊椎畸形综合征(CVM)、白细胞粘附缺陷病(BLAD)、尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)这三种隐性遗传缺陷病的试剂盒中的应用，属于分子生物学技术领域。

背景技术

遗传缺陷多数是由缺陷基因引起的，具有先天性和家族性特征。遗传缺陷会使发育个体出现生理功能的损害，可以致畸、半致死或致死，从而影响家畜的生活力，降低经济价值，给畜牧生产带来了损失。美国荷斯坦牛协会公牛系谱记录的遗传疾病共有13类，其中奶牛脊椎畸形综合征(CVM)、白细胞粘附缺陷病(BLAD)、尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)是最常见的三种常染色体隐性遗传疾病。

脊椎畸形综合征(Complex Vertebral Malformation，CVM)是荷斯坦牛的一种由常染色体单基因控制的隐性遗传病。该病的发生是由于编码UDP-N-乙酰葡糖胺载体的溶质转运家族35-3(SLC35A3)基因第4外显子559处发生G→T突变，导致180处缬氨酸置换为苯丙氨酸，致使异常的核苷酸糖转运到高尔基体。其主要症状为早期流产、早产和死胎，出生的患病犊牛体型较小、体重偏轻、颈部较短、颈部胸部脊椎骨或肋骨出现各式各样的病变、同时四肢关节僵直、呈现对称的向后方翻转弯曲。另外，脊椎畸形综合征对奶牛的繁殖性状也有很大的影响，母牛的不返情率提高，产犊间隔大大延长，流产比例增加。

白细胞粘附缺陷病(Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency，BLAD)是一种牛的造血系统遗传性疾病。本病病因与人的白细胞粘附缺陷病相同，为白细胞表面的粘附分子(整合素)CDl8亚单位编码序列383位碱基由A突变为G所致，相应的位于胞外高度保守区的128位天门冬氨酸变成了甘氨酸，致使白细胞表面的CDl8整合素亚单位表达明显减少或缺乏，导致机体在炎症反应时外周血液中的白细胞不能通过自身整合素与血管内皮粘附分子相互作用而黏附到血管内皮上，最终无法穿过血管壁到达病原侵入部位和对病原体直接做出反应,进而导致机体发病。患牛常发生口腔粘膜及舌粘膜溃疡，牙龈萎缩，病程长者前臼齿脱落。粘膜和肠道等软组织发生反复性感染，泛发性淋巴样增生；胃肠粘膜溃疡、慢性腹泻，生长发育受阻，最终导致早期死亡。

尿苷酸合酶缺乏症(Deficiency of uridine monophophate synthase，DUMPS)又称单谱症，是导致荷斯坦牛胚胎早期死亡的一种遗传缺陷。其遗传学基础是奶牛1号染色体q31区(BTAI)上的UMPS基因C-末端密码子405处存在着一个C/T点突变，可导致原来编码精氨酸的“CGA”转变为编码终止密码子的“TGA”，导致基因编码产物催化亚基C-末端缺失76个氨基酸。其主要症状为血液中瓜氨酸含量升高，尿素循环受阻引起高氨血症，从而导致犊牛在出生一周内死亡，或者母牛怀孕约40天左右时流产。

目前，针对这三种遗传缺陷病已经建立了一些分子检测技术，如等位基因特异性PCR技术(AS-PCR)、单链构象多态性分析法(SSCP)、SNP芯片检测法等等。