[发明专利]一种基于大数据的黄花乌头DNA条形码及黄花乌头的鉴定方法

权利要求书

1.一种基于大数据DNA条形码鉴定位点的黄花乌头鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测样本DNA；

（2）利用DNA条形码引物进行PCR扩增，得到扩增产物，所述DNA条形码引物序列为SEQID NO.1和SEQ ID NO.2；

（3）对所述扩增产物进行测序，测序结果与SEQ ID NO.3比对，特异性位点为：第89bp为A，第443bp为A，第447bp为A，第491bp和第492bp为AT，第499bp为T，第577bp为C；

若扩增产物符合上述特异性位点序列信息，则该待测样本为黄花乌头。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR的扩增体系为25µL，组份配比如下：10μmol/L正反向引物各1.0µL，25mmol/L 10×PCR缓冲液2.5µL，2.5mM dNTP 2.5µL，5unit/µL Taq DNA聚合酶 0.25µL，50~100ng/L模板DNA 1.0µL，ddH₂O 16.75µL。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR的扩增条件为：94℃预变性2 min，1循环；94℃变性30s，52℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环；72℃延伸7min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序为双向测序，所述测序的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述测序的反应体系为5µL：其中ddH₂O 3µL，10μmol/L正反向引物各0.25µL，测序反应混合物0.5µL，PCR纯化产物1µL。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述测序的反应条件为：96℃预变性10s，50℃退火5s，60℃延伸4min，33个循环。