[发明专利]一种具有抗幽门螺旋杆菌活性的抗菌肽的制备方法在审
申请号: | 201710995599.0 | 申请日: | 2017-10-23 |
公开(公告)号: | CN107641150A | 公开(公告)日: | 2018-01-30 |
发明(设计)人: | 张孝林;汪建飞;蒋安民;贡成良;范涛;张钦元 | 申请(专利权)人: | 安徽科技学院 |
主分类号: | C07K14/00 | 分类号: | C07K14/00;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866;C12N5/10;A61K38/16;A61P31/04 |
代理公司: | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371 | 代理人: | 蔡蓉 |
地址: | 239000*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 具有 幽门 螺旋 杆菌 活性 抗菌 制备 方法 | ||
1.一种具有抗幽门螺旋杆菌活性的抗菌肽的制备方法,其特征在于,其包括:
构建编码包含SEQ ID NO:1所示的抗菌肽的融合蛋白的核苷酸序列;
构建包含所述核苷酸序列的重组载体;
将所述重组载体用于转化或转染宿主细胞,并使所述核苷酸序列在所述宿主细胞中表达。
2.根据权利要求1所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述融合蛋白具有以下一级氨基酸序列结构:
载体蛋白-连接肽-蛋白酶作用位点肽段-抗菌肽;
所述抗菌肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述载体蛋白包括家蚕杆状病毒核多角体蛋白、谷胱甘肽巯基转移酶、绿色荧光蛋白、或泛素样小蛋白。
4.根据权利要求2所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述蛋白酶作用位点肽段为特异性蛋白内切酶的作用位点,所述特异性蛋白内切酶包括肠激酶、凝血酶、凝血因子Xa、PreScission蛋白酶、烟草花叶病毒蛋白酶、人鼻病毒蛋白酶或泛素样小蛋白。
5.根据权利要求2所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述蛋白酶作用位点肽段包括DDDDK、LVPRGS、IEGR、IDGR、LEVLFQ、ENLYFQG、LEVLFQG或泛素样蛋白三级结构。
6.根据权利要求1所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述重组载体包括重组质粒,所述重组质粒的表达载体为pFastDual载体。
7.根据权利要求6所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述重组载体还包括重组穿梭载体,所述重组穿梭载体是将所述重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞中,并在重组酶的作用下发生重组所制得的重组Bacmid。
8.根据权利要求7所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述重组载体还包括重组病毒,所述重组病毒是通过将所述重组穿梭载体转染到蚕BmN细胞中制得。
9.根据权利要求8所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述宿主细胞为蚕蛹细胞。
10.根据权利要求5所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,在使所述核苷酸序列在所述宿主细胞中表达,得到融合蛋白后,还包括:用特异性蛋白内切酶对所述融合蛋白进行酶切。
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