[发明专利]一种肺炎链球菌培养的培养基

说明书

本发明提供了一种肺炎链球菌培养基，包括基础培养基和培养基添加剂，其中所述基础培养基包括蛋白胨、牛肉粉、酵母粉、葡萄糖、氯化钠、氢氧化钠、碳酸氢钠、无水磷酸氢二钠、氯化钙，所述培养基添加剂含有至少一种血清蛋白。本发明的培养基的制备方法简单、成本低廉、摆脱了对CO₂培养环境的依赖，因而不需要CO₂培养箱。与传统胰蛋白胨大豆培养基相比，本发明的培养基保存使用更方便。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种肺炎链球菌培养的培养基。

背景技术

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是威胁人类健康的主要病原菌之一。可引起大叶性肺炎、婴幼儿脑膜炎、中耳炎和心内膜炎等疾病。诱发较高的发病率和死亡率，在婴幼儿、老年人以及免疫缺陷病人中多发。

肺炎链球菌属革兰染色阳性菌，兼性厌氧菌，其生长对培养条件和培养基营养物质均要求严苛。美国模式培养物保藏中心(ATCC)作为全球知名的微生物保藏机构，推荐了两种肺炎链球菌培养基：脑心浸液培养基和胰蛋白胨大豆培养基。脑心浸液培养基，其配方如下：牛脑浸粉7.7g、牛心浸粉9.8g、蛋白胨10g、葡萄糖2g、氯化钠5g、磷酸氢二钠2.5g、水1000ml。胰蛋白胨大豆培养基，其配方如下：胰蛋白胨15g、大豆胨5g、氯化钠5g、水1000ml，灭菌后加入终浓度5％脱纤维羊血。

但上述两种培养基在肺炎链球菌培养时均存在问题，使用脑心浸液培养基培养肺炎链球菌，必须在5-10％CO₂浓度下才能良好生长，而提供CO₂的培养环境需要CO₂培养箱，但一般微生物实验室不一定具备这样的实验设备，从而限制了肺炎链球菌试验的开展。而且脑心浸液培养基因含有牛脑浸粉和牛心浸粉两种特殊营养物质，使其相较普通微生物培养基价格高出许多。使用胰蛋白胨大豆培养基，因加入终浓度5％脱纤维羊血，虽然不需要在5-10％CO₂浓度下肺炎链球菌也能良好生长，但脱纤维羊血一来价格昂贵、二来保存时间很短(4度冰箱保存二周)，若不能及时使用完，将带来浪费而增加实验成本，也给肺炎链球菌培养工作造成诸多不便和麻烦。因此，寻找一种适合于肺炎链球菌生长的成本低廉、保存使用方便，可以完全摆脱肺炎链球菌培养对CO₂培养环境和脱纤维羊血严苛要求的液体培养基，将对肺炎链球菌研究开展起到积极的促进作用，也是本发明重点解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种肺炎链球菌培养基，包括基础培养基和培养基添加剂，其中所述基础培养基包括蛋白胨、牛肉粉、酵母粉、葡萄糖、氯化钠、氢氧化钠、碳酸氢钠、无水磷酸氢二钠、氯化钙，所述培养基添加剂含有至少一种血清蛋白。

优选地，本发明所述的肺炎链球菌培养基中，所述基础培养基包括以下成分：蛋白胨15-25g、牛肉粉3-5g、酵母粉3-6g、葡萄糖1-3g、氯化钠1-3g、氢氧化钠0.5-1.5g、碳酸氢钠1-3g、无水磷酸氢二钠0.2-0.5g、氯化钙0.1-0.2g、蒸馏水加至1000ml。

优选地，本发明所述的肺炎链球菌培养基中，所述基础培养基包括以下成分：蛋白胨20g、牛肉粉5g、酵母粉5g、葡萄糖2g、氯化钠2g、氢氧化钠1g、碳酸氢钠2g、无水磷酸氢二钠0.4g、氯化钙0.1g、蒸馏水加至1000ml。

优选地，本发明所述的肺炎链球菌培养基中，所述血清蛋白为牛血清蛋白；更优选地，所述血清蛋白为5％-10％牛血清蛋白；更优选地，所述血清蛋白为终浓度0.1％-0.5％牛血清蛋白；最优选地，所述血清蛋白为终浓度0.2％牛血清蛋白。

本发明的另一方面为提供一种肺炎链球菌培养基的配制方法，包括以下步骤：将上述肺炎链球菌培养基中基础培养基中各个组分按比例混合，完全溶解、高压灭菌后，加入培养基添加剂，即得肺炎链球菌培养基。