[发明专利]高效组织细胞裂解液在检测上呼吸道感染病毒反应中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效组织细胞裂解液，尤其涉及高效组织细胞裂解液在检测上呼吸道感染病毒反应中的应用。

背景技术

在上呼吸道感染病毒的临床检测方法中，分子检测方法具有敏感度强、准确率高和操作简便等优点，近几年来在临床检测和感染性疾病监控中得到越来越广泛的应用。高效组织细胞裂解液提取病毒基因组是我公司开发的一项新型病毒基因组样本制备方法。

发明内容

针对应用组织细胞裂解液裂解咽拭子样本提取病毒基因组的过程，我们通过研究摸索并掌握了一项技术诀窍：采用调节裂解液的NP-40浓度和添加反应酶保护剂BSA（牛血清白蛋白）来提高裂解效率效率同时降低裂解液对RT-PCR反应的影响。

以相同的取样方式获取多份咽拭子样本，采用配制不同浓度的NP-40裂解液裂解，通过荧光定量PCR反应结果中的荧光信号值、Ct值、反应曲线图等数据来判断不同浓度NP-40裂解液的裂解效率，选择最佳的NP-40浓度。相比于NP-40浓度为0.25%、0.5%、1%、4%时，NP-40浓度为2%时，裂解效率的到显著提高。

在确定裂解液中NP-40最佳浓度的基础上，通过添加反应酶保护剂BSA来提高反应过程中反应酶的稳定性，降低裂解液中其他组分对反应酶活性的抑制。对BSA的浓度设置不同的梯度，通过荧光定量PCR反应结果中的荧光信号值、Ct值、反应曲线图等数据来判断含不同浓度BSA的裂解液对反应效率的影响，选择BSA最佳的浓度。相比于BSA浓度为0.2 mg/ml、0.5 mg/ml、2mg/ml时，BSA浓度为1mg/ml时，RT-PCR能到达较高的反应效率。

经过研究，当裂解液中NP-40的浓度为2%，BSA的浓度为1 mg/ml时，是本技术的最佳反应条件，达到了样本高裂解效率，RT-PCR高反应效率的技术目标，满足了临床检测的实际需求。