[发明专利]一种痕量异硫氰酸酯的简便测定方法

说明书

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种痕量异硫氰酸酯的简便测定方法。

背景技术

异硫氰酸酯(ITCs)是一种小分子物质，其包括苄基异硫氰酸酯（BITC），苯乙基异硫氰酸酯（PEITC）和萝卜硫素（SF）等，在包西兰花、卷心菜、芥兰、花茎橄榄和孢子甘蓝等十字花科蔬菜中含量比较丰富。当植物细胞受损时，存在植物的细胞空泡中的硫代葡萄糖苷（glucosinolate）会被黑芥子硫苷酶（myrosinase）水解，产生ITCs。流行病学资料显示，十字花科蔬菜中的ITCs对胃癌、乳腺癌、肝癌 、食道癌 、肺癌等癌细胞增殖具有明显的阻断作用。

ITCs分子-N=C=S基团中的C有高度的亲电性，所以能够与亲核试剂发生亲核加成反应。硫醇、氨基、羟基、羧酸、β-羰基等都能作为亲核试剂与ITCs发生亲核加成反应，生成相应的硫脲。因此，当样品中存在蛋白质等物质时，ITCs能够与蛋白质形成加合物。

已经有多种ITCs的分析方法，如可通过液相色谱或气相色谱法分析。但是气相色谱法测定时，ITCs在气化室中会部分发生分解，造成结果不准确；液相色谱法的检出限较低，不适宜用于痕量ITCs的检测。当ITCs浓度很低时，一般用环缩合法分析。环缩合法的原理是ITCs与1,2-苯二硫醇形成1,3-benzodithiole-2-thione，再通过液相色谱法分析ITCs的总量。环缩合法具有操作简单、灵敏度高的优点（最低检出限可达nmol级，远低于气相和液相色谱法直接分析），但是直接分析动物粪便或组织水提液中ITCs含量时，由于ITCs会与样品中的蛋白质等形成加合物，ITCs测定值会小于实际值；用有机溶剂萃取法时，有机溶剂会干扰环缩合反应，造成结果不准确，因此用有机溶剂萃取后，需要蒸发除去有机溶剂，再加入水溶解后分析，步骤较为繁琐。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种痕量异硫氰酸酯的简便测定方法的技术方案。

所述的一种痕量异硫氰酸酯的简便测定方法，其特征在于包括以下步骤：取待测样品水提液加入过量GSH溶液或Cys溶液，混匀，在室温下静置10～20min，然后在7000～10000g离心10～20min除去沉淀，再用环缩合法分析上清液中ITCs含量。

所述的一种痕量异硫氰酸酯的简便测定方法，其特征在于所述的GSH溶液或Cys溶液浓度为100～130mM，加入比例V（待测样品水溶液）：V（GSH溶液或Cys溶液）为100:1～150:1。

上述的一种痕量异硫氰酸酯的简便测定方法，设计合理，通过加入过量的还原型谷胱甘肽（GSH）或半胱氨酸（Cys），使ITCs与GSH或Gys形成加合物，再通过环缩合法分析其ITCs的含量，提高了ITCs的分析准确度。

上述的一种痕量异硫氰酸酯的简便测定方法，ITCs有萝卜硫素（SF）、、Erucin、苯乙基异硫氰酸酯（PEITC）、苄基异硫氰酸酯（BITC）等。

上述的一种痕量异硫氰酸酯的简便测定方法，主要用于含有蛋白质，并且ITCs浓度很低样品的检测，主要样品有血液、肠道内容物、粪便或植物组织等。

具体实施方式

以下实施例来进一步说明本发明。

实施例1

20ml待测样品，含有20μM的萝卜硫素（一种ITCs）和2mg/ml的酪蛋白。溶液中加入200μl，110mM的GSH溶液，混匀后静置20min。8000g离心20min，取上清液液进行环缩合反应，具体步骤为：取200μl上清液，加入400μl，20mM的BDT，65℃反应2h，冷却后微滤膜过滤，高效液相色谱法分析其产物的含量，液相条件为流动相甲醇:水=80:20，柱温30℃，流速为1ml/min，进样量为10μl。液相分析结果表明，加入GSH的样品，ITCs浓度测定值为19.9μM；而同等条件下，不加GSH的样品，ITCs浓度测定值为13.6μM，加入GSH后ITCs含量显著升高，接近实际浓度。

实施例2

20ml待测样品，含有20μM的苯乙基异硫氰酸酯（PEITC，一种ITCs）和2mg/ml的酪蛋白。溶液中加入150μl，110mM的Cys溶液，混匀后静置10min。10000g离心10min，取上清液液按照实施例1方法进行环缩合反应，再通过实施例1的方式进行液相分析。结果表明，加入Cys的样品，ITCs浓度测定值为19.8μM；同等条件下不加Cys的样品，ITCs浓度测定值为13.7μM，加入Cys后ITCs含量显著升高，接近实际浓度。

实施例3

20ml待测样品，含有20μM的PEITC和0.2g的小鼠粪便。溶液中加入200μl，110mM的GSH溶液，混匀后静置20min。9000g离心10min，取上清液液按照实施例1方法进行环缩合反应，再通过实施例1的方式进行液相分析。结果表明，加入GSH的样品，ITCs浓度测定值为18.9μM；同等条件下不加GSH的样品，ITCs浓度测定值为9.6μM，加入GSH后ITCs含量显著升高，接近实际浓度。