[发明专利]一种CIK细胞冻存液

说明书

本发明公开了一种以白术内酯Ⅱ为保护成分的CIK细胞冻存液，包括无血清培养基、血清和二甲基亚砜，还含有白术内酯Ⅱ，无血清培养基为RPMI 1640，血清为胎牛血清或所述CIK细胞供体的自体血清，优选CIK细胞供体的自体血清，无血清培养基、血清和二甲基亚砜按照体积比5:4:1混合。本发明发现白术内酯Ⅱ可以提高CIK细胞的冻存复苏率，且不影响CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，可以制备成CIK细胞冻存液用于CIK细胞的冻存，以保证患者在放射治疗和化学治疗后能够回输足量的CIK细胞。

技术领域

本发明属于细胞冻存保护领域，涉及CIK细胞冻存液，具体涉及一种以白术内酯Ⅱ为保护成分的CIK细胞冻存液。

背景技术

冻存是最常用的细胞贮藏手段，大多数肿瘤细胞经冻存复苏后仍然保持原有特性。而CIK这一类人工诱导培养的异质性细胞，冻存时间和体系都会对其免疫表型及杀伤活性产生一定影响(参考文献：不同冻存时间对CIK细胞免疫表型及杀伤活性的影响，现代肿瘤医学，2016；不同方式冻存的外周血干细胞复苏培养CIK细胞的实验研究，现代诊断与治疗，2014；冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞免疫表型及细胞内因子表达的影响，郑州大学学报，2014)。

为保证患者在放射治疗和化学治疗后能够回输足量的CIK细胞，有必要开发一种既能降低冻存对CIK细胞损伤又不影响其杀瘤活性的细胞冻存液。

白术内酯Ⅱ为白术中的一种化合物，与白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ为白术中的主要内酯成分。其化学结构式如下，生源上白术内酯Ⅲ为白术内酯Ⅰ的氧化产物，白术内酯Ⅱ为白术内酯Ⅲ的脱水产物。通常认为，白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ为白术的主要活性成分，是其抗炎和抗癌有效成分(参考文献：白术内酯类成分及其药理作用研究进展，中国药房2012年第23卷第39期)。

经研究发现白术内酯Ⅱ有诸多特别的、不同于白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以白术内酯Ⅱ为保护成分的CIK细胞冻存液。

实现本发明上述目的技术方案如下：

一种以白术内酯Ⅱ为保护成分的CIK细胞冻存液，包括无血清培养基、血清和二甲基亚砜，还含有白术内酯Ⅱ。

优选地，所述无血清培养基为RPMI 1640。

优选地，所述血清为胎牛血清或所述CIK细胞供体的自体血清，优选CIK细胞供体的自体血清。

优选地，所述无血清培养基、血清和二甲基亚砜按照体积比5:4:1混合。

优选地，所述白术内酯Ⅱ在无血清培养基、血清和二甲基亚砜混合液中的浓度为30-50μM。

白术内酯Ⅱ用于制备CIK细胞冻存液提高CIK细胞复苏率的用途。

本发明的突出优点：

本发明发现白术内酯Ⅱ可以提高CIK细胞的冻存复苏率，且不影响CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，可以制备成CIK细胞冻存液用于CIK细胞的冻存，以保证患者在放射治疗和化学治疗后能够回输足量的CIK细胞。

附图说明

图1为CIK细胞活率检测结果；

图2为CIK细胞肿瘤杀伤活性测定结果。

具体实施方式

下面就结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，由于篇幅原因，实验过程的描述无法做到非常详细，凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作。

一、实验材料

白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ自制，纯度大于98％。