[发明专利]获得甘蔗健康种苗的方法

权利要求书

1.一种获得甘蔗健康种苗的方法，其特征在于对甘蔗植株分别进行SCBV、Lxx、SrMV、SCMV和ScYLV的PCR检测，将检测健康的甘蔗植株移种到具有隔离保护措施的网室大棚内，作为健康甘蔗种源以及为组培扩繁提供外植体材料。

2.根据权利要求1所述的获得甘蔗健康种苗的方法，其特征在于所述PCR检测按以下操作进行：先提取甘蔗植株叶片的DNA，检测SCBV和Lxx，再对不带SCBV和Lxx的样品提取RNA，检测SrMV、ScMV、ScYLV，以上病毒害均不带者即为健康的甘蔗植株。

3.根据权利要求2所述的获得甘蔗健康种苗的方法，其特征在于所述PCR检测各病毒害的PCR引物分别为：

SrMV：F：ACAGCAGAWGCAACRGCACAAGC，R：CTCWCCGACATTCCCATCCAAGCC；

SCMV：F：AATCTTGAGGAATGCGGAAAAC，R：ATCGATAGGCCCACAAATGAGTCT；

ScYLV：F：AATCAGTGCACACATCCGAG，R：GGAGCGTCGCCTACCTATT；

SCBV：F：GATGGATGACTGTTTCAGAGGC，R：GAGGGATGGTAAGATTTGGC；

Lxx：1：CCGAAGTGAGCAGATTGACC，2：ACCCTGTGTTGTTTTCAACG。

4.根据权利要求3所述的获得甘蔗健康种苗的方法，其特征在于包括以下步骤：

A、健康甘蔗植株的筛选；

B、健康甘蔗植株的隔离保存；

C、健康外植体的培育；

D、健康种苗的扩繁。

5.根据权利要求4所述的获得甘蔗健康种苗的方法，其特征在于步骤A按以下操作进行：

从甘蔗种植大田中采集长势良好、外观没有病害症状的甘蔗植株叶片，对这些甘蔗植株进行SrMV、SCMV、ScYLV、SCBV和Lxx病毒害检测，先提取这些叶片的DNA，检测SCBV和Lxx；再对不带SCBV和Lxx样品的样品提取RNA，检测SrMV、SCMV、ScYLV，以上病毒害均不带者即为健康甘蔗。

6.根据权利要求4所述的获得甘蔗健康种苗的方法，其特征在于步骤B按以下操作进行：

将经检测的健康甘蔗植株移种到具有隔离保护措施的网室大棚中。

7.根据权利要求4所述的获得甘蔗健康种苗的方法，其特征在于步骤C按以下操作进行：

①外植体处理：去除蔗芽的外层老叶，经75％酒精消毒后放入灭菌的超净台，取芽尖2-3mm的生长点接种；或者用甘蔗顶端去除老叶的分生组织作为外植体，需先用75％酒精消毒15min，再经升汞消毒30min，蒸馏水翻转震荡洗涤3-4遍，每遍洗涤5min，将消毒后的分生组织放入灭菌的超净台，再去除1-2层老叶，将其切成1-2mm厚的薄片接种；

②诱导与分化：将步骤①中获得的外植体接种在诱导培养基上，每瓶接种2个芽尖或5个分生组织薄片；当形成愈伤组织时将其转接到分化培养基上，每瓶接种四块，诱导与分化的培养条件均为温度29-31℃、光强2300Lx左右；

③生根培养与假植：将分化出嫩叶的组培苗转接到生根培养基上，置于29-31℃、2300Lx左右光强度的条件培养25天长成完整植株；经炼苗后将组培苗假植在大棚内的沙床上，26-28天即可移种。

8.根据权利要求7所述的获得甘蔗健康种苗的方法，其特征在于步骤C中：

诱导培养基为MS+3.0mg/L 2，4-D+3％柠檬酸+3％Sugar+0.6％Agar，

分化培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+3％柠檬酸+3％Sugar+0.6％Agar，

生根培养基为1/2MS+4.0mg/L NAA+3％Sugar+0.6％Agar。