[发明专利]泽陆蛙抗氧化肽及其基因和应用

说明书

本发明涉及一种活性多肽及其基因和在制药中的应用，所述的泽陆蛙抗氧化肽是由9个氨基酸组成的环肽，分子量1122.62道尔顿，等电点8.01，其氨基酸序列为：Arg Cys Phe Tyr Phe Gly Gln Cys Thr(RCFYFGQCT)(SEQ ID NO.1)，上述多肽的第二位半胱氨酸和第八位半胱氨酸形成分子内二硫键，第九位苏氨酸带有酰胺化修饰。所述泽陆蛙抗氧化肽的基因序列由SEQ ID NO.4组成，其中编码有功能的成熟泽陆蛙抗氧化肽是第196‑222位核苷酸。该泽陆蛙抗氧化肽具有结构简单、人工合成方便的特点，可以作为制备抗氧化功效的药物和食品添加剂中的应用。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种从动物组织得到的蛋白以及在生物制药中的用途。

背景技术

生物分子的氧化是一个自由基介导的过程，它对食品和生物系统会造成许多不利的影响。在好氧器官内，与动脉硬化、癌症等多种疾病相关的游离自由基不可避免的随着氧代谢的过程而产生。另外，氧化应激被认为与多种疾病例如老年痴呆症、帕金森氏症，这此病理系引发于糖尿病、由糖尿病引起的并发症、类风湿性关节炎和肌萎缩性脊髓侧索硬化症引发的神经退行性变有关(Food Chemistry,2008,107,1485–1493)。在食品中，营养成分的氧化会产生过氧化物，其不仅会影响食品营养价值，造成食品品质的下降，严重的甚至还会导致摄入者的身体疾病(Journal of Food Science,1999,64,1000–1004)。因此寻找安全的抗氧化剂以抑制过氧化物产生一直是生化营养学的研究热点。由于BHT、BHA和没食子酸丙酯等化学合成抗氧化剂比天然抗氧化剂具有更好的效果和更便宜的价格，因此被广泛应用于食品行业中，但是，目前有研究发现合成抗氧化剂对人体肝、脾、肺等器官有积蓄性致癌左右，从而引起了人们对其安全性的担忧，并且开始慢慢限制起在食品中的使用，于是让人们把目光转向天然的抗氧化剂(Food Processing,1993,12,54–56)。α-生育酚是一种普遍适用的天然抗氧化剂，它能有效保持食品中油脂的稳定性，但却不利于食品保存。因此有必要寻找其他来源的天然抗氧化剂。

由于两栖动物居住环境的特殊性，他们有时会受到自由氧等损害，这些活性自由氧能通过氧化脂肪、变性蛋白、破坏核酸，导致对代谢的严重后果和对组织和细胞的大量破坏。为了抵消这种氧化损害生存下来，两栖动物已经进化形成了抗氧化防御系统，抗氧化多肽是其中的一类重要组分。目前，从R.pleuraden、R.catesbeiana、O.livida等物种中鉴定了是十几中具有抗氧化活性的多肽(Chem Rev.2015,115(4):1760-1846)。因此，两栖动物皮肤是天然抗氧化多肽的重要来源。此外，来自两栖动物的皮肤抗氧化肽通常还兼有免疫调节、组胺释放和免疫调节等功能，如，Pipinin、XO-4、pLR、pYR和HR-II等有显著的促肥大细胞脱粒和组胺释放功能，pleurain-D4、pleurain-E1、pleurain-G1、pleurain-J1、pleurain-K1、pleurain-M1、pleurain-N1、pleurain-N1、pleurain-P1和antioxidin-RP1能调节细胞因子的合成(Chem Rev.2015,115(4):1760-1846)；因此两栖动物皮肤也是免疫调节肽的重要来源。中国博大的多物种生物资源是结构多样性小分子有机化合物的重要来源，其中一些生物活性物质早已被中医记载和采用。很多两栖类动物作为中国传统中药和民族药物而广泛应用。泽陆蛙(Fejervarya limoncharis)是传统中药材，其全体有清热解毒，健脾消积功效。可用于治疗痈肿、疔疖、乳痈、小儿疳积、热痢等多种病症。但是由于泽陆蛙个体小和捕捉困难，目前对其皮肤药理活性物质的结构与功能研究在世界范围内还未见报道，其作为中药疗效的物质基础仍不为人们所知。

进入21世纪以来，基因组学的飞速发展及合成生物学的兴起大大促进了天然产物的结构与功能研究；本发明利用基因组学方法和药理学研究获得泽陆蛙抗氧化肽编码基因，发明人将本发明的泽陆蛙抗氧化肽编码基因经基因数据库进行搜寻比较，未发现有任何相同基因。发明人将本发明的泽陆蛙抗氧化肽全序列结构经蛋白数据库进行搜索比较未发现有任何相同的多肽。