[发明专利]一种适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法

权利要求书

1.一种适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体选择

选择形成绿色芽点的青蒿或薯蓣的胚性愈伤组织，取出切小块；

（2）诱变处理

将步骤（1）处理好的愈伤组织用1.0-3.0 mmol/LCa²⁺溶液浸泡处理；然后浸泡于含有浓度为0.1%秋水仙素的溶液中30-90 min；然后不清洗直接转入固体培养基中，在4°C条件下共培养，取出清洗，超净工作台上吹干水分；再接种于含有浓度为1.0-5.0 mg/L秋水仙素的固体培养基MS+BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+多效唑2.0 mg/L上处理20-60 d；

（3）形态与染色体鉴定

将步骤（2）中植株生长到3-4 cm，根长出0.5-1 cm 时，与二倍体对照植株做比对分析，根据二者在外观形态叶片宽度、厚度、茎粗度及气孔保卫细胞的大小和密度的差异，初步筛选表型变异明显的植株进行生根，然后取变异苗根尖包含有分生区部位的部分，进行染色体核型鉴定；染色体数目以染色体组为单位成倍增加的即为多倍体；

（4）移栽管理

将鉴定为四倍体的植株，打开瓶盖炼苗，定植，通风，进行种苗正常管理。

2.根据权利要求1所述的适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，所述的薯蓣包括盾叶薯蓣或菊叶薯蓣。

3.根据权利要求1或2所述的适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，步骤（1）选择青蒿或薯蓣的胚性愈伤组织，转入分化培养基中培养，当愈伤组织开始形成绿色芽点时，取出切1.0-3.0 cm小块。

4.根据权利要求3所述的适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，步骤（1）选择优质单株青蒿、盾叶薯蓣或菊叶薯蓣的胚性愈伤组织，转入MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.5mg/L分化培养基中培养3-10 d； 当愈伤组织开始形成绿色芽点时，取出切成1.0-3.0 cm大小，均匀放置垫4-5层无菌滤纸的培养皿中，然后在超净工作台吹1-5 h。

5.根据权利要求1或2所述的适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，步骤（2）中将步骤（1）处理好的愈伤组织用1.0-3.0 mmol/LCa²⁺溶液浸泡处理20-40min。

6.根据权利要求1或2所述的适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，步骤（2）中Ca²⁺溶液浸泡处理过的愈伤组织浸泡于含有浓度为0.1%秋水仙素的溶液中60min。

7.根据权利要求1或2所述的适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，步骤（2）中秋水仙素浸泡后的愈伤组织不清洗直接转入MS₀培养基中，在4°C条件下共培养72 h，取出清洗5-6次，放置在无菌滤纸上沥干水分，超净工作台上吹10-60 min。

8.根据权利要求1或2所述的适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，步骤（2）的愈伤组织在含有秋水仙素的固体培养基中培养的温度25℃，光照强度2000LX，光照时间10-12h。

9.根据权利要求1或2所述的适用于药用植物青蒿和薯蓣多倍体品种培育的方法，其特征在于，步骤（4）将鉴定为四倍体的植株，打开瓶盖炼苗，取出清洗根部培养基，定植于装有高压灭菌后栽培基质的培养箱中，栽完浇透水，盖上盖子，移栽20 d后开始通风1-2 次/7d，通风时间由10 min 逐渐增加至全天，揭盖前不用浇水，在通风时喷少量清水在叶面上，30-35 d 后逐渐撤去盖子，进行种苗正常管理。