[发明专利]一种小花山奈的组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种小花山奈的组织培养快速繁殖方法。该方法包括外植体前处理、芽基部增殖、丛生芽诱导、继代增殖、生根壮苗和炼苗移栽。将消毒好的芽基部外植体接种到增殖培养基上培养，直至外植体基部形成球状；切割增殖的芽基部，转接到丛生芽诱导培养基上诱导丛生芽；当继代丛生芽苗高4～6cm时，切下丛生芽转移至壮苗生根培养基上进行培养，当壮苗生根培养基上的苗高6～8cm时，在温室自然光照下炼苗7～10d，取出苗，洗净根部培养基，培养后得到移栽苗。本发明可在短期内获得能保持母株优良性状的组培苗，对母株损伤不大，投入低产出高，可提供大量的小花山奈组培苗。

技术领域

本发明涉及小花山奈，具体涉及一种小花山奈的组织培养快速繁殖方法，属于植物组织培养快速繁殖技术领域。

背景技术

姜科(Zingiberaceae)植物可通过播种、切分根茎、扦插和组织培养的方法繁殖(高江云等，2006；熊友华等，2005，2007；吴繁花等，2009；黄赛等，2016；吴德邻等，2016；李冬梅等，2017)。小花山奈(Kaempferia parviflora)属于姜科山奈属(Kaempferia)植物，株高约30cm，叶丛生，叶片椭圆形，叶面绿色，叶缘红色，叶背具暗红色斑纹；花序包藏于一钟状总苞内，花多数较小，依次开放，花白色，唇瓣具紫红色斑纹；花期5‐10月；根茎块状，药用；观叶类，株形好，叶漂亮可赏，可作为室内观叶和林下地被植物(高江云等，2006；吴德邻等，2016)。小花山奈由于不结果，故不能进行播种繁殖；其也没有茎杆，也不能用扦插繁殖；其根茎块状，也不能用带叶根茎扦插；因此，只能采用切分根茎和组织培养的方法繁殖。但因为母本量不足，切分根茎分株繁殖速度慢，而且对母株损伤也很大，短期内得不到大量种苗。

姜科山奈(Kaempferia galanga)的组织培养选用块茎上刚萌发的芽为外植体时，采用75％酒精消毒1min，无菌水漂洗1次，0.1％升汞消毒10min，无菌水漂洗2次，0.1％升汞消毒6min的消毒效果最好，存活率平均达56.66％，其污染率只有6.67％，但外植体存活数天后，植株有细菌污染现象，这可能是山奈自身带有内生菌所致，导致外植体灭菌困难(吴繁花等，2009)。由于山奈属植物的多样性和块茎自身带有内生菌，故采用常规组织培养的消毒程序灭菌困难。山奈块茎刚萌发的芽为外植体时，适宜的诱导培养基为MS+6‐BA3.0mg/L+NAA 0.1mg/L，芽的萌发率达100％，分化率为146.67％(吴繁花等，2009)。但取小花山奈块茎上萌发的芽基部为外植体时，接种至诱导培养基MS+6‐BA 3.0‐5.0mg/L+NAA0.1mg/L+椰汁10.0％+蔗糖20g/L+卡拉胶粉9.5g/L，芽的诱导率为0。目前，尚未见对小花山奈进行组织培养和种苗大规模生产的报道。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供一种小花山奈的组织培养快速繁殖方法，可在短期内获得大量性状稳定的种苗，能保持母株的优良特性，具有投入低产出高的优势。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种小花山奈的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

(a)外植体前处理：采集小花山奈的根茎用自来水清洗干净，剪掉根茎上的须根后，消毒后晾干；再放入洗净消毒的河沙中，恒温发芽，洗净根茎芽，取其芽基部为外植体材料；

(b)芽基部增殖：将消毒好的芽基部外植体接种到增殖培养基上培养，直至外植体基部形成球状；所述的芽基部增殖培养基成分为MS、6‐苄氨基腺嘌呤8.0～10.0mg/L、奈乙酸0.01～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉胶粉9.5～10.0g/L；

(c)丛生芽诱导：切割增殖的芽基部，转接到诱导培养基中诱导丛生芽；所述丛生芽诱导培养基成分为MS、6‐苄氨基腺嘌呤3.0～5.0mg/L、奈乙酸0.01～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉胶粉9.5～10.0g/L；