[发明专利]正丙醇-酒石酸钾钠双水相体系提取分离纯化根皮苷的方法

说明书

本发明提供了一种微波辅助正丙醇‑酒石酸钾钠双水相体系提取分离纯化根皮苷的制备方法。制备方法为原料药材粉碎，以正丙醇‑酒石酸钾钠‑水组成的双水相体系为提取溶剂微波辅助提取，分相，上相除盐，回收溶剂得根皮苷粗品，再经重结晶得根皮苷晶体，重结晶溶剂为65%体积异丙醇和35%体积水。制备方法具有集提取和萃取于一体，易于放大、可连续化操作、易集成技术、绿色环保、根皮苷转移率和纯度高等优点。

技术领域

本发明属于天然产物活性成分提取技术领域，涉及一种微波辅助正丙醇-酒石酸钾钠双水相体系提取分离纯化根皮苷的制备方法。

背景技术

双水相体系是两种成相物质在水中充分溶解后，在分子间相互排斥力和空间阻碍作用的影响下，经过一段时间平衡，形成互不渗透的两相体系。目前常见的双水相体系由聚合物- 聚合物-水、聚合物-盐-水、离子液体-盐-水、小分子亲水有机溶剂-盐-水组成。传统的天然产物活性成分提取采用水或含水乙醇提取，初生代谢和次生代谢产物共存，有效和无效成分共存，进一步精制采用提取液浓缩后萃取和色谱分离法，步骤繁琐。双水相体系作为提取溶剂提取具有集提取和萃取于一体，易于放大、可连续化操作、易集成技术等优点。聚合物-聚合物-水、聚合物-盐-水、离子液体-盐-水双水相体系作为提取溶剂生产成本高，小分子亲水有机溶剂-盐-水作为提取溶剂生产成本低。盐包括有机盐和无机盐，其中有机盐可生物降解，具有绿色环保的优点。

根皮苷是根皮素的葡萄糖苷，化学名称为1-(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4,6-二羟基苯基)-3-(4- 羟基苯基)-丙酮，分子式为C₂₁H₂₄O₁₀。根皮苷是一种高甜度的天然甜味剂，根皮苷通过阻断肠道葡萄糖运转蛋白，抑制葡萄糖吸收，减少血糖来源；通过阻断肾小管葡萄糖转运蛋白，抑制肾小管对葡萄糖的吸收，促进糖排泄，降低血糖，减少高血糖的毒性反应，使胰岛素抵抗大鼠的糖耐量和胰岛敏感性恢复正常。根皮苷无论是作为食品添加剂，还是功能性食品的开发利用都有潜在的应用价值。根皮苷存在于蔷薇科苹果属植物中，是根皮苷的主要来源，从苹果皮或叶中提取分离纯化根皮苷的方法主要有有机溶剂萃取法分离、大孔吸附树脂柱色谱分离、离子交换树脂柱色谱分离、聚酰胺柱色谱分离、离心分配色谱分离和高速逆流色谱分离。上述方法都存在一定的不足，有机溶剂萃取法分离使用大量有机溶剂，安全性差，单独使用产品纯度低，所得产品在食品领域中应用受不宜添加的限制；大孔吸附树脂柱色谱分离和离子交换树脂柱色谱分离步骤繁琐，生产成本高；离心分配色谱分离和高速逆流色谱分离生产设备昂贵。同时苹果皮或叶中根皮苷的含量低，壳斗科植物多穗石柯叶中根皮苷的含量是苹果皮或叶中根皮苷含量的数倍。关于从多穗石柯叶提取分离纯化根皮苷在我国已有专利报道，CN104356184B采用超滤技术联合大孔吸附树脂技术分离纯化根皮苷，步骤繁琐，大孔吸附树脂残存惰性溶剂前处理难度大，同一生产企业生产的同一型号树脂各批之间比表面积和功能基团含量差别大，分离纯化中重现性差。文献报道采用高速逆流色谱从多穗石柯叶提取分离纯化根皮苷，根皮苷的质量分数为96.7％(Sun,YS,et al.Journal of Chromatography B,2015,1002,372-378)；采用聚苯乙烯-氨基葡萄糖交联树脂分离纯化根皮苷，根皮苷的质量分数为66.56％，采用聚苯乙烯-β-环糊精交联树脂分离纯化根皮苷，根皮苷的质量分数为 79.48％，采用大孔吸附树脂D101分离纯化根皮苷，根皮苷的质量分数为44.68％，采用大孔吸附树脂AB-8分离纯化根皮苷，根皮苷的质量分数为52.48％(Wang,QW,et al.Chemical Papers,2014,68,1521-1531)。尚未见双水相体系作为提取溶剂联重结晶技术高收率提取分离纯化制备高纯度根皮苷的报道。

发明内容

本案发明人采用浊点法测定30℃时正丙醇-酒石酸钾钠-水组成的双水相体系的双节线数据，运用MATLAB软件计算液液平衡数据，根据数据计算不同系线长和不同相比的正丙醇- 酒石酸钾钠-水组成双水相体系提取溶剂中三者的组成质量分数，优选重结晶溶剂，建立集提取分离为一体的微波辅助正丙醇-酒石酸钾钠双水相体系提取分离纯化根皮苷的制备方法，因而完成了本发明。