[发明专利]一种食源性菌株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种基于食源性菌株的烟丝发酵菌剂的制备方法，其特征在于：该菌株分类命名为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）L14，保藏编号为CCTCC M 2017457；按4-8‰接菌量，单位v/v，将在MRS液体培养基中活化14-16h的植物乳杆菌L14接种于MRS液体培养基中，静置培养，离心沉淀菌体，采用无菌去离子水洗涤菌体后，加入无菌去离子水制成浓度为10⁸-10¹⁰ CFU/mL菌悬液，即得到植物乳杆菌L14发酵菌剂。

2.权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述食源性植物乳杆菌的制备方法按以下进行：

采集豆豉样品若干份，利用改良MRS固体培养基筛选乳酸菌，单菌落在MRS液体培养基中过夜培养后，保存于-80℃冰箱中，随机选取7株乳酸菌，在烟叶培养基中划线分离，37℃培养48 h，选取1株长势最好菌株，命名为L14，接种于MRS固体培养基，37℃培养48 h后，观察菌落形态；筛选分离得到一株能以烟叶为唯一营养源的植物乳杆菌；

所述的改良MRS固体培养基：蛋白胨10 g/L，牛肉粉8 g/L，酵母粉4 g/L，葡萄糖20 g/L，吐温-80 1 g/L，K₂HPO₄ 2 g/L，NaAc 5 g/L，MgSO₄ 0.2 g/L，MnSO₄ 0.05 g/L，柠檬酸三铵2 g/L，CaCO₃ 10 g/L，溴甲酚紫0.04 g/L，琼脂15 g/L，115℃灭菌20 min；

所述的烟叶培养基：将品种为K326、具有1年陈化龄的烟叶磨成粉末，称取0.8-1.0 g粉末和1.5 g琼脂，用水调节至100 mL，115℃灭菌20 min，冷却倒平板，备用。

3.权利要求1所述的烟丝发酵菌剂在改善卷烟品质中的应用。

4.权利要求3所述的烟丝发酵菌剂在改善卷烟品质中的应用方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤（1），发酵菌剂制备

按4-8‰接菌量，单位v/v，将在MRS培养基中活化14-16 h的植物乳杆菌L14接种于100mL MRS液体培养基中，30-37℃静置培养10-20 h，8000-10000 rpm转速下离心10-20 min沉淀菌体，采用无菌去离子水洗涤1-3次菌体后，用无菌去离子水制成浓度为10⁸-10¹⁰ CFU/mL菌悬液，即得到植物乳杆菌L14发酵菌剂；

步骤（2），卷烟品质改善

将5-6 mL植物乳杆菌L14菌剂，喷洒在含水率为10-12%的25-30 g烟丝中，于28-30℃，50-60%湿度，恒温恒湿培养箱中发酵7-14天，将发酵烟丝做成卷烟。

5.权利要求4所述烟丝发酵菌剂在改善卷烟品质上的应用，其特征在于：最佳提升卷烟品质的条件为：

步骤（1）中，接菌量为4‰，活化时间为16 h，30℃静置培养10 h，8000 rpm离心20 min沉淀菌体，无菌去离子水洗涤2次，发酵菌剂浓度为10⁸ CFU/mL；步骤（2）中，喷洒发酵菌剂的体积为6 mL，烟丝重量为30 g，烟丝含水量为12%，于30℃，60%湿度，恒温恒湿培养箱中发酵7天。