[发明专利]一种保加利亚乳杆菌胞壁蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法

权利要求书

1.一种保加利亚乳杆菌胞壁蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)保加利亚乳杆菌培养基制备:

将乳糖15-25g、酵母粉15-25g、硫酸锰10-20mg、吐温80 0.5-1.0mL，水苏糖1.5-2.5g、蛋白胨4-6g、磷酸氢二钠4-6g、谷氨酸5-10mg、丙氨酸5-10mg添加到纯净水中，定容至1L，调节pH值至5.5-7.0，于121℃灭菌得保加利亚乳杆菌培养基；

2)保加利亚乳杆菌培养及菌体收集：

将保加利亚乳杆菌按2％-5％的接种量接入保加利亚乳杆菌培养基中，35-41℃恒温培养18-24h，然后离心收集菌体沉淀，之后用无菌生理盐水洗涤，在4-10℃、6000-8000r/min下离心15-25min，得保加利亚乳杆菌菌泥；

3)保加利亚乳杆菌胞壁蛋白酶制备：

向每g保加利亚乳杆菌菌泥中添加20-30mL的磷酸缓冲液，35-45℃保温1-3h后，在4-10℃、6000-8000r/min下离心20-30min，所得上清液即为胞壁蛋白酶的酶液，采用1-3KDa超滤去除小分子物质，然后在保留液中添加CaCl₂，控制CaCl₂的浓度为8-15mM，冷冻干燥得保加利亚乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉；

其中，磷酸缓冲液的pH＝7.0，每升磷酸缓冲液中含15-30g甘氨酸和2000-4000U变溶菌素；

4)羊乳活性饮料的制备：

将鲜羊奶经脱脂后调节pH值至6.0-8.0按质量体积比向其中加入1-3％的保加利亚乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉和0.01-0.04％的CaCl₂，于35-45℃下酶解2-4h，然后再按质量体积比添加0.5-1.0％的β-环糊精，0.2-0.4％的拐枣多糖、0.3-0.5％的菊糖、4-6％的赤藓糖醇、3-5％的木糖醇、0.1-0.3％的L-苹果酸，0.10-0.25％的柠檬酸，0.10-0.25％的柠檬酸钠混合均匀后经15-30℃均质、杀菌后即得到含保加利亚乳杆菌胞壁蛋白酶的羊乳活性饮料；

所述拐枣多糖制备过程为：取新鲜拐枣经洗净后进行打浆，然后加入20倍拐枣重量的水，搅拌均匀，于90℃条件下保温2h，然后抽滤获得拐枣多糖提取液，冷却至38℃后按质量体积比接入2％的保拉迪酵母活化液，37℃恒温培养24h除去拐枣中的单糖和双糖，离心收集保拉迪酵母菌体，将上清液用旋转蒸发仪浓缩至1/20，再按1:3的体积比加入无水乙醇，然后用布氏漏斗抽滤获得拐枣粗多糖，再将拐枣粗多糖复水加入氯仿和正丁醇除蛋白，然后取水相再次加入氯仿和正丁醇，三次脱蛋白后通过冷冻干燥获得拐枣多糖。