[发明专利]臭参素C及其作为Sirt1抑制剂和其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于化学药物领域，涉及臭参素C及其在治疗与Sirt1相关疾病中的应用。

背景技术

沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2homolog-1,Sirt1)是一种广泛存在于哺乳动物细胞中的核蛋白，主要通过对组蛋白、转录因子及其他蛋白修饰的赖氨酸残基进行去乙酰化而调节基因的表达，进而广泛参与多种生理活动如：(1)SIRT1与能量代谢方面：SIRT1可与过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPAR-γ)协同刺激因子a(PGC-1a)及肝细胞核因子4a(HNF4a)结合成一种蛋白复合物，在NAD参与下，SIRT1通过去乙酰化PGC-1a来激活HNF4a，从而调节糖异生相关基因转录，进而增强肝脏糖异生。另一方面，SIRT1通过结合PPAR-γ上2个辅助蛋白核受体共抑制蛋白(nuclear receptor corepressor，NCoR)和视黄酸及甲状腺激素受体沉默中介蛋白(silencing mediator ofretinoid and hormone receptor，SMRT)抑制PPAR-γ活性，进而在热量摄入减少时，促进白色脂肪组织中的脂肪动员。(2)SIRT1与胰岛素分泌:SIRT1通过抑制解偶联蛋白2(UCP-2)来促进胰岛b细胞分泌胰岛素。UCP-2作为线粒体内膜上的转运蛋白，使线粒体呼吸作用中的氧化磷酸化解偶联。由于此过程中能量以热能形式释放，使ATP合成减少，此时β细胞内ATP/ADP比值降低。ATP敏感的K+通道开放受其影响所导致的细胞内[Ca²⁺]下降，抑制了细胞胞吐作用，使胰岛素释放减少。(3)SIRT1与细胞寿命：SIRT1可与多种蛋白相互作用，最初研究认为SIRT1的主要功能是应激条件下减少细胞凋亡及衰老，增加细胞存活率。SIRT1可负调控肿瘤抑制子p53，这是一种最早发现的SIRT1非组蛋白底物，SIRT1将p53中382位Lys残基去乙酰化，降低p53与DNA顺式元件结合力，减少由其诱导的细胞凋亡。因此，SIRT1也被看作为一种有潜力的肿瘤激动子。(4)SIRT1与肿瘤多药耐药:SIRT1在许多耐药的肿瘤株中高表达。最近研究表明，SIRT1在肿瘤耐药中的作用可能主要与其能靶向并调节肿瘤抑制子p53、p73、E2F1和FOXO3a的活化相关。换言之，在SIRT1依赖的转录因子去乙酰化用于调节基因表达期间，细胞避开了化疗药物所致的增殖阻滞和细胞死亡。而这些生理活动与代谢综合征、2型糖尿病、肿瘤和衰老等密切相关，因此寻找调节Sirt1的小分子抑制剂或激动剂对于研究疾病生理、病理过程及开发相关药物意义重大。

臭参生长在云南寻甸、宜良一带，经权威鉴定发现其为党参(Codonopsis pilosula)，由于云南独特的地理环境包括气候因素，臭参(根)的功能与北方产党参明显不同，我们对其进行了持续研究，本发明从中发现的臭参素C是新化合物，其作为Sirt1抑制剂属于首次发现。

发明内容

本发明是对臭参(Codonopsisi pilosula)进行了更深入研究，从其水溶性部位中发现了臭参素C及其抑制Sirt1活性，本发明的目的在于提供具有Sirt1抑制活性的化合物臭参素C及其该发明的化合物在制备与Sirt1相关疾病中的应用，以及以该化合物为有效成分的药物组合物。本发明的另一目的还在于提供制备臭参素C的天然分离方法。

本发明的上述目的是由下述的技术方案得以实现的：

下述结构式所示的臭参素C(1)，

制备臭参素C的方法，取干燥臭参(Codonopsis pilosula)根(20kg)，粉碎，85％乙醇浸渍提取(80L×4×24h)，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物，剩余水层减压浓缩得水提取物，水层提取物行D101大孔树脂(乙醇：水，5％，40％，95％)，1.5-2倍柱体积溶剂洗脱，得三个组份(Fr.1–Fr.3)。Fr.2(30g)行Sephadex LH-20(甲醇)，TLC指导合并相同成分，得二个组份(Fr.2.1和Fr.2.2)。其中，Fr.2.2(19g)经RP-18柱层析(甲醇：水，10％–70％)得八个组份(Fr.2.2.1–Fr.2.2.8)。Fr.2.2.2(2.3g)经Sephadex LH-20(甲醇)层析，TLC指导合并相同成分，然后经HPLC(甲醇：水，11％)纯化得臭参素C(3.2mg)。