[发明专利]干扰Hsa-miR-449a表达的试剂及其应用

说明书

本发明属于基因工程领域，涉及干扰Hsa‑miR‑449a表达的试剂及其应用，主要涉及在制备抑制肝癌干细胞自我更新的药物中的应用。促进肝癌干细胞自我更新的癌基因Hsa‑miR‑449a，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明首次公开了Hsa‑miR‑449a在肝癌干细胞中表达并且对于维持肝癌干细胞自我更新至关重要。Hsa‑miR‑449a基因在抑制肝癌干细胞自我更新中的应用，是通过干扰Hsa‑miR‑449a在肝癌干细胞中的表达来抑制肝癌干细胞自我更新。干扰Hsa‑miR‑449a的表达试剂可以制备抑制肝癌干细胞自我更新的药物，用于靶向治疗肝癌，对延长肝癌生存时间具有重要意义。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及干扰Hsa-miR-449a表达的试剂及其应用，尤其涉及在制备抑制肝癌干细胞自我更新的药物中的应用。

背景技术

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病机制尚未明确，目前对于肝癌的治疗并不理想，术后的复发和转移仍是亟待解决的一大难题。近年来的研究使肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)的概念深入人心，越来越多的证据表明肿瘤干细胞与肿瘤的生长、耐药、复发和转移等密切相关。迄今为止，已在血液系统肿瘤及脑胶质瘤、肝癌、乳腺癌、结直肠癌等30余种常见肿瘤中证实了肿瘤干细胞的存在。但是关于肿瘤干细胞内部的调控机制目前并不清楚，是否可以利用针对肿瘤干细胞调控分子的抑制剂来辅助肿瘤治疗也未有明确报道。

微小RNA(microRNA,miRNA)是一种长度约为22～28个核苷酸的非编码RNA，它们通过mRNA介导的特异性的基因沉默导致靶mRNA降解及抑制蛋白质的合成，调控转录后基因表达水平，影响细胞增殖、分化和凋亡。近年来，miRNA介导的转录后基因沉默(Post-transcriptional Gene Silencing,PTGS)与肿瘤形成的相关性已成为关注的热点。肿瘤细胞与正常组织细胞miRNA表达谱有显著差异，miRNA在肿瘤形成过程中可能扮演着重要的角色。

Hsa-miR-449a是肿瘤研究中新近兴起的一种miRNA，在前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、肝癌等多种肿瘤中存在异常表达，可能与肿瘤的发生和发展过程密切相关，研究其功能及调控机制，可为肿瘤诊断、治疗和预后判断提供重要线索。

shRNA又称“短发夹RNA”，克隆到shRNA表达载体中，在细胞内该发夹序列被表达出来，形成一个“双链RNA”(shRNA)，并被RNAi通道处理，诱导实现靶mRNA的降解。

发明内容

综合现有技术的分析，Hsa-miR-449a目前认为其为抑癌基因可以阻断肿瘤的发生发展，但是发明人在研究过程中意外发现Hsa-miR-449a在肝癌干细胞中高表达提示其可能在肝癌干细胞中作为癌基因，促进肝癌的发生发展，而目前并没有学者研究Hsa-miR-449a在干细胞中的作用，更没有关于Hsa-miR-449a是癌基因的报道，发明人的研究打破了传统的关于Hsa-miR-449a的学术理论，进一步，发明人提供了Hsa-miR-449a新的功能和用途，以及一种干扰Hsa-miR-449a表达的试剂及该试剂在制备抑制肝癌干细胞自我更新的药物中的应用。

有鉴于此，本发明的目的首先在于提出Hsa-miR-449a新的功能及应用。其次，本发明的目的在于提供一种干扰Hsa-miR-449a表达的试剂及应用，为肝癌的基因治疗提供新靶点。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

促进肝癌干细胞自我更新的癌基因Hsa-miR-449a，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

Hsa-miR-449a目前认为其为抑癌基因可以阻断肿瘤的发生发展，但是发明人在研究过程中意外发现Hsa-miR-449a在肝癌干细胞中表达可以作为癌基因，促进肝癌的发生发展。