[发明专利]立显蛋白电泳预制胶片剂的制备及应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质电泳领域，特别涉及一种蛋白质电泳分析用的立显蛋白电泳预制胶片剂的制备及应用。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带。SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质 SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响。这种电泳方法称为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS—PAGE)。由于SDS PAGE可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度。但是目前的SDS PAGE有以下弊端：现在常用的染色方法如考马斯亮蓝染色法、银染法等，需要配制凝胶，而且需要在蛋白质的凝胶电泳结束之后对凝胶进行固定、染色、脱色等繁琐处理才能观察，耗时长，不可能快速知晓实验结果，也不便于在实验过程中观察结果。且固定、染色、脱色需要大量试剂（尤其是有机溶剂）浸泡凝胶，使用量很大，增加了对环境的污染。对于以上情况，现有的改进方法有：1) 使用微波炉加热以加快反应速度；2) 调整染色液配方以提高染色效率；3）预制胶等。但是以上的方法都没有从本质上改变凝胶电泳实验中蛋白质配胶、染色步骤繁琐、污染严重等问题，而且染色仍然必须在电泳结束后才能进行。所以，需要一种同时具备快速配制及无需染色的蛋白电泳凝胶。

发明内容

本发明的目的是提供一种立显蛋白电泳预制胶片剂的制备及应用，能够解决现有技术配胶、染色步骤繁琐、污染严重等问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种蛋白质电泳分析用的显色液，包括异硫氰酸基团（—NCS）和含有异硫氰酸基团（—NCS）的色素，其特征在于：其在蛋白质电泳分析中的操作方法为：所述显色液与待测蛋白混匀，70-100℃下反应，形成有色蛋白质样品液，从而实现对蛋白质的显色，从而无需染色，脱色繁琐的实验步骤。

更优选的，所述显色液在蛋白质电泳分析中的操作方法为：所述显色液与待测蛋白以1：1比例混匀，85℃下反应，加热10min，形成有色蛋白质样品液。

优选的，所述显色液为一种碱性液体。

优选的，所述显色液在蛋白质电泳分析中可与常规蛋白电泳凝胶配套使用。

本发明还提供了一种蛋白质电泳分析用的预制胶片剂，包括分离胶片和浓缩胶片。

优选的，所述分离胶片包括6%-15%双丙烯酰胺溶液、1%-10%SDS、1.0-1.5M Tris、3%-10%海藻糖。

更优选的，所述分离胶片是由8%双丙烯酰胺溶液、10%SDS、1.5M Tris（pH8.8）、6%海藻糖混合压片而成。

优选的，所述浓缩胶片包括1%-5%双丙烯酰胺溶液、1%-10%SDS、0.5-1.0M Tris、3%-10%海藻糖。

更优选的，所述浓缩胶片是由5%双丙烯酰胺溶液、10%SDS、1.0M Tris（pH6.8）、6%海藻糖混合压片而成。

优选的，所述预制胶片剂在蛋白质电泳分析中的操作方法为：将分离胶片、浓缩胶片分别溶于灭菌纯水，振荡至完全溶解；向分离胶液中加入一定浓度的APS、TEMED，混匀后注胶；紧接着向浓缩胶液中加入一定浓度的APS、TEMED，混匀后注胶，插上合适的梳子。

更优选的，所述预制胶片剂在蛋白质电泳分析中的操作方法为：

①将分离胶片溶于6ml灭菌纯水，振荡至完全溶解；

②将浓缩胶片溶于4ml灭菌纯水，振荡至完全溶解；

③向分离胶液中加入10ul 10% APS、2ul TEMED，混匀后注胶；

④紧接着向浓缩胶液中加入4ul 10% APS、1ul TEMED，混匀后注胶，插上合适的梳子。

因此，无需计算繁琐的试剂用量且可避免接触有毒试剂（丙烯酰胺）。

优选的，预制胶片剂在蛋白质电泳分析中可与常规的染色脱色液配套使用。

优选的，所述预制胶片剂的形状不限，片剂由不透光的材质真空包装。

本发明最后提供了一种立显蛋白电泳预制胶片剂，包括如上所述的显色液及预制胶片剂。

优选的，立显蛋白电泳预制胶片剂在蛋白质电泳分析中可与市面上所有电泳缓冲系统兼容。