[发明专利]基于EML4-ALK抗体的isPLA技术在检测非小细胞肺癌中的应用

说明书

一种ALK(3B12)和EML4(1D11)单抗结合原位邻位连接isPLA技术在检测非小细胞肺癌中的应用。本发明利用单抗技术制备了两株分别识别EML4和ALK的高亲和性单克隆抗体，并以其为邻位探针建立了一种新型EML4‑ALK检测技术——基于新型EML4和ALK抗体的isPLA技术。该技术具有高效、灵敏、经济、便捷等优点，并可能应用于临床诊断，为今后肿瘤标志物和治疗靶点的检测提供了新的方向。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于EML4-ALK抗体的isPLA技术在检测非小细胞 肺癌中的应用。

背景技术

肺癌是肺组织内细胞生长失去控制而导致的一种疾病。在过去的半个多世纪中，肺癌的 发病率和死亡率逐年增加，已经从20世纪初的一种罕见疾病发展为当今的全球头号癌症杀 手。根据世界卫生组织(WHO)定期公布的资料，肺癌的发病率和死亡率在世界各国尤其 是发达国家呈明显的上升趋势，已经成为许多发达国家最常见的肿瘤，位列男性常见恶性肿 瘤第一位和女性常见恶性肿瘤第二位，并且成为恶性肿瘤中最常见的死亡原因。在我国，男 性肺癌年龄标准化发病率为47.51/10万，女性肺癌年龄标准化发病率为22.69/10万，并且呈 逐年增加的趋势，参见，She J,Yang P,Hong Q,等人Lung cancer in China:challenges and interventions[J].Chest.2013,143(4):1117-1126。预计到2025年，我国每年仅死于肺癌的人数就 将接近100万，成为世界第一肺癌大国。

根据肺癌细胞的分化程度和形态特征，临床上将其分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌 (non-small lung cancer,NSCLC)两类，其中非小细胞肺癌占到85％左右。根据预后情况，几种 非小细胞肺癌又可以归为三类：鳞状细胞癌、肺腺癌和大细胞肺癌。尽管诊断方法和治疗手 段都有了很大的进步，70％的NSCLC患者在初次确诊时大多已处于ⅢB/Ⅳ期，其中约40％ 的患者失去手术治疗的机会，5年生存率往往低于5％，参见Molina J R,Yang P,Cassivi S D, 等人Non-small cell lung cancer:epidemiology,risk factors,treatment,and survivorship[J].Mayo Clin Proc.2008,83(5):584-594。因此，针对该疾病分子起源和疾病发生发展过程的研究，对其预防 和治疗具有重要意义。

非小细胞肺癌(Non-small-cell carcinoma NSCLC)是世界上癌症相关死亡的首要原因。每 年大概有120万患者被诊断出非小细胞肺癌，同时，110万人死于该症。虽然在过去的数据 十年中对NSCLC进行大量的研究，NSCLC患者的五年存活期依然很低。肿瘤结节转移 (TNM)分期系统在国际上广为认可，用于NSCLC的预后预测。尽管如此，早期的患者显示出变化范围较大的生存率，这就使得寻找能更好的预测结果的有效预后标志物成为必须。因 此，人们在借鉴可改善NSCLC诊断的分子标志物方面做了大量的工作。适合的标志物不仅 能提供预后信息，而且，也有助于预测患者是否可以受惠于新的治疗策略或额外的治疗措 施。

随着肺癌个性化治疗研究的不断深入，渐变性淋巴激酶(anaplastic lymphomakinase， ALK)酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor，TKR)逐渐发展为的一个重要的NSCLC 标志物和治疗靶点，其代表性的亚型是棘皮动物微管相关蛋白4-渐变性淋巴激酶(echinoderm microtubule associated protein like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK) 融合基因。