[发明专利]一种苹果腐烂病病原菌快速接菌及致病力快速鉴定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种苹果腐烂病病原菌快速接菌以及致病力快速鉴定的方法，属于生物技术领域。

背景技术

苹果树腐烂病(apple tree Valsa canker)是由苹果黑腐皮壳(Valsa mali)引起的枝干皮层腐烂病害，据报道V.mali属于子囊菌门，黑腐皮壳科，黑腐皮壳属。自然条件下常表现有枝枯型和溃疡型两种症状，前者常见于小枝上，引起纸条顶端枯死形成枯梢；而溃疡型病斑常见于主干及侧枝上，引起树皮腐烂。病斑部位常隆起，水渍状，有酒糟味，后期病部干瘪、塌陷，呈黑褐色，其上着黑色小点为病菌的分生孢子器，在雨水充足或高湿的条件下，会分泌出黄色卷须状的分生孢子角，分生孢子经雨水和气流传播造成危害。其病原菌可以侵染苹果树的主枝、主干和果实等多个部位，轻者造成主枝、主干枯死，使果树结果量和结果年限锐减，影响苹果的产量和质量；重者全株枯死，甚至全园毁灭，已成为影响苹果生产的主要制约因素之一。

苹果(Malus domestica Borkh.)是世界四大水果之一，我国的苹果生产、加工和出口规模目前均已处于世界领先地位。2011年中国苹果的总产量已超过世界总量的50％，出口103万吨，中国对世界苹果增产的贡献率超过100％，已经逐步成为世界苹果发展的驱动力。陕西、甘肃、山东、辽宁、河南、北京、河北、云南、山西、江苏省10个省市是我国苹果的优势产区，苹果栽培面积和产量均占全国的90％以上，然而，苹果树腐烂病的严重发生，10个省市苹果腐烂病的发病情况属河南省发病株率最高，为85.1％，山西省最低为19.5％，其他省份变动在30％-60％之间(曹克强,国立耘et al.2009)，直接严重影响和制约了苹果产量和品质的提高，从而制约了我国农业产业经济发展。

除了栽培苹果，苹果腐烂病也侵染新疆野苹果(Malus sieviersii,又名塞威士苹果)，并造成严重的生态灾难。新疆野苹果，分布于天山山脉，包括中国新疆伊犁地区和中亚五国。在我国，新疆野苹果集中分布在新疆伊犁的巩留、新源、霍城和裕民等地。在中亚，新疆野苹果分布在哈萨克斯坦、吉尔吉斯斯坦、乌兹别克斯坦、塔吉克斯坦和土库曼斯坦共和国。新疆野苹果种质资源丰富，具有很高的遗传多样性，挖掘利用的潜力很大，不仅是我国新疆天山野果林区中珍贵的第三纪孑遗植物，也是我国经济林资源中唯一天然的基因库，更是世界野苹果基因库的重要组成部分，且研究证明新疆野苹果是现代栽培苹果(Malus domestics Borkh.)的祖先，具有很重要的科研和保护价值(Daccord et al.2016,Duan et al.2017)。然而由于种种原因，近十年来，新疆野苹果林遭受了毁灭性的生态危害，大面积的野苹果纯林衰败甚至死亡。据调查，1959年野苹果林面积达9300hm²，随着病虫害以及人为活动影响，2006年面积仅为5000hm²。苹果腐烂病是一种弱寄生病菌。野果林遭受强烈人为干扰以及小吉丁虫(Agrilus mali Mats.)虫害大面积集中爆发，导致野果林大面积衰败；羸弱植株进一步被游离的腐烂病孢子侵染，进一步爆发弱寄生所导致的腐烂病，成为野苹果林大面积死亡的最后推手。因此，为了进一步有效保护天山野果林，加快新疆野苹果腐烂病机理研究，有效进行腐烂病防治，我们需要一个快速、高效的苹果树腐烂病接菌及致病力鉴定的方法。然而目前，尚缺乏这样一套高效成熟的、简便易行的尤其适合野外操作的方法体系。