[发明专利]一种基于核酸适体的荧光检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于核酸适体的荧光检测试剂盒，包括核酸外切酶Ⅲ，反应缓冲液，DNA1、DNA2和茎环结构核酸H1。使用核酸适体为分子识别元件进行特异性识别，形成具有平末端的3'双链核酸结构，加入核酸外切酶Ⅲ后进行循环信号扩增，从而使大量的双链DNA变成单链DNA，加入荧光染料后，通过区分荧光强度变化检测待测分子含量。该发明对马拉硫磷检测的线性范围为10pM到100nM，检测限为5pM，同时检测体系具有很好的特异性，常见其他类似物不会干扰检测结果。检测过程无需分离纯化过程，简单混合即可检测，具有操作简单，成本低廉，响应迅速等优点，可用于食品、水源、土壤等样品中农药残留的快速高灵敏检测。

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，特别涉及一种基于核酸适体的荧光检测试剂盒。

背景技术

核酸适体(aptamer)是经体外筛选技术SELEX(指数富集配体系统进化)筛选出的能特异结合蛋白质或其他小分子物质的寡聚核苷酸片段。核酸适体作为一种新型的分子识别工具，与传统的抗体相比不仅具有亲和力高，特异性好，还具有易合成、易修饰、稳定性好等优点，在蛋白质、分子检测领域具有良好的应用潜力。近年来，结合核酸适体的分子特性，将蛋白质的检测转换为特异识别的核酸适体的检测，不仅避免了传统蛋白质检测方法中操作复杂、常需对蛋白质进行标记、不易保持活性等缺点，还有效地提高了蛋白质检测的效率与灵敏度。

现有基于核酸适体的检测方法，一般比较复杂，难以通过变更核酸适体序列的方式实现对不同物质的检测，导致其设计较为困难，限制了其使用范围。开发出一种具有良好通用性的检测试剂盒具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供克服现有技术的不足，提供一种基于核酸适体的荧光检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种基于核酸适体的荧光检测试剂盒，包括可区分单链和双链DNA荧光染料，核酸外切酶Ⅲ，反应缓冲液，DNA1、DNA2和茎环结构核酸H1，其中：

DNA1为待测分子的核酸适体；

DNA2与DNA1部分互补，互补配对后DNA2的3’末端具有凸起；

H1包含a、b、c、b*以及d五个部分，a部分为5'端凸起，d部分为3'端凸起，b及b*互补形成H1茎环结构的茎，c为H1茎环结构的环；d可与DNA2的5'端部分互补配对形成双链DNA，并在H1的3’端形成3'平末端或3'凹陷末端。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，H1的a与DNA2的3’端部分互补配对形成双链DNA，并在DNA2的3’端形成凸起。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，DNA1和DNA2互补配对后，DNA1的3’端具有凸起。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，互补配对后DNA2的3’末端至少6个碱基是凸起的。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，a部分的碱基数为8到12个。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，c部分的碱基数为12到21个。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，d部分的碱基数为10到15个。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，b以及b*部分的碱基数为7到12个。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，DNA1和DNA2互补的碱基数为16～27个。

作为上述荧光检测试剂盒的进一步改进，反应缓冲液包含15mM Tris-HCl，50mMNaCl，10mM MgCl₂,pH 7.0。

一种马拉硫磷残留检测试剂盒，包括：