[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒弱毒株、其培养方法及应用

说明书

一种猪流行性腹泻病毒弱毒株、其培养方法及应用，该猪流行性腹泻病毒JS/PEDV/2/2014G100，保藏编号CCTCC NO.V201728，全长27939bp，其ORF3基因中比PEDV强毒株缺失49个核苷酸，遗传进化分析表明，该毒株归属于G1亚群，在Vero细胞上的增殖不依赖于胰酶，属于细胞适应株，其具有较好的交叉保护性、抗原性和免疫原性，感染猪体临床表征正常，体重增长稳定，不出现排毒现象，体内能产生高水平PEDV抗体，血清IgG抗体的OD450值可达1.2，免疫后60d抗体的OD450水平仍维持在1.0，为后续疫苗研制提供了科研材料。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒弱毒株、其培养方法及应用。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的，以哺乳仔猪呕吐、腹泻、脱水为典型特征的一种急性、高度接触性传染病。不同年龄、性别和品种的猪均易感染，但其中对哺乳仔猪的危害最严重。

1971年英国首次报道了PED，随后日本、韩国、瑞士、德国、比利时、加拿大等国家陆续报道了该病。中国于1976年首次报道了该病，目前，全国26个省市自治区均有发生，特别是2010年以来，全国大面积流行给养猪业带来了巨大的损失。

秦谷雨等(安徽省仔猪腹泻5种病毒感染情况的调查研究，动物医学进展，2012.33(12)：59-63)对安徽省仔猪腹泻调查情况显示，PEDV阳性病例达59.1％，阳性猪场占75.7％；PEDV与TGEV混合感染占4.3％，PEDV与PCV2混合感染占18.8％，PEDV与PRV混合感染占10.8％。王子龙等(河北省猪病毒性腹泻流行病学调查，黑龙江畜牧兽医，2014，5：59-60)对报道河北省猪腹泻病中PEDV检出率高达86.21％。蔡汝健等(2010-2013年华南地区猪流行性腹泻病流行情况调查及防控效果，广东农业科学，2013，11：105-114)检测我国南方地区PEDV的流行情况，显示PEDV的阳性率高达80％。这些数据证实，PEDV是目前猪病毒性腹泻的主要病原，与国内外当前调查结果高度一致。

目前市场上PEDV疫苗主要有猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗，猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒(G5型)三联活疫苗(弱毒华毒株+CV777株+NX株)，猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗(HB08株+ZJ08株)等。

尽管疫苗的使用普及率很高，但以PEDV为主要病原引起的腹泻疫情仍然持续存在。PEDV流行株和疫苗株S基因的差异可能是导致基于CV777疫苗株免疫效果不好的原因。因此，PEDV流行株的分离对于猪流行性腹泻病病原学研究和疫苗的研制非常重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪流行性腹泻病毒弱毒株、其培养方法及应用，该猪流行性腹泻病毒弱毒株属于冠状病毒科(Coronaviridae)α-冠状病毒属(Alphacoronavirus)猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus)，名称为猪流行性腹泻病毒JS/PEDV/2/2014 G100(porcine epidemic diarrhea virus)，于2017年7月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国·武汉·武汉大学，保藏编号CCTCCNO.V201728，其对近年来国内流行的PEDV毒株具有较好的交叉保护性，抗原性和免疫原性均较好，感染猪体临床表征正常，体重增长稳定，不出现排毒现象，体内能产生高水平PEDV抗体，血清IgG抗体的OD450值可达1.2，免疫后60d抗体的OD450水平仍维持在1.0。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种猪流行性腹泻病毒弱毒株，名称为猪流行性腹泻病毒JS/PEDV/2/2014 G100，保藏编号CCTCC NO.V201728。