[发明专利]一种玉米须多糖中糖醛酸含量的测定方法及其抗氧化作用

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖中糖醛酸含量的测定方法，具体涉及一种基于间羟基联苯法测定多糖中糖醛酸含量的方法，属于分析化学技术领域。

背景技术

糖醛酸又名透明质酸，是一种酸性粘多糖，它是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，广泛分布于人体各部位，其中皮肤也含有大量的糖醛酸，人类皮肤成熟和老化过程也随着糖醛酸的含量和新陈代谢而变化，它可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂。

多糖中糖醛酸的测定方法有两种：一种是咔唑-硫酸法；另一种是间羟基联苯法。

在硫酸咔唑比色法中，由于待测溶液中一般也存在中性单糖、戊糖和己糖与糖醛酸的吸收波长相同，会使糖醛酸的测定值偏离实际含量，会对测量结果造成较大的误差。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种多糖中糖醛酸含量的测定方法。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案，其特征在于，包括以下步骤：

（1）精密称取玉米须多糖（含量91.86ug/mg）0.0500 g，于50 mL容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀，离心，配成1 mg/mL的多糖溶液；

（2）称取0.477 g硼砂加入浓硫酸100 mL超声溶解；

（3）称取间羟基联苯0.15 g，用0.5%氢氧化钠溶液溶解并定容至100 mL容量瓶中；

（4）精密移取1 mg/mL玉米须多糖溶液0.5 mL至于10 mL容量瓶中，缓慢加入5 mL硫酸-硼砂溶液，摇匀后，至沸水浴中煮沸5min，冷却5min至室温后，加入0.15%间羟基联苯溶液80 μL，混匀，静置20 min。用蒸馏水做空白液调零，在紫外分光光度仪中于528nm出测定其吸收值；

（5）以半乳糖醛酸溶液为标准液，绘制标准曲线；

（6）将多糖的吸收值代入标准曲线中计算糖醛酸含量。

根据上述的基于玉米须多糖中糖醛酸含量测定的方法，其特征在于，所述浓硫酸浓度为98%。

根据上述的基于玉米须多糖中糖醛酸含量测定的方法，其特征在于，在步骤（1）中，多糖离心速度为3000 r/min，离心时间为10 min。

根据上述的基于玉米须多糖中糖醛酸含量测定的方法，其特征在于，在步骤（4）中，沸水浴时间为5 min，冷却5min至室温后，反应完成后再进行20min冷却处理。

本发明的有益之处在于：本发明基于间羟基联苯定量测定多糖中糖醛酸含量的原理，多聚己糖醛酸与含四硼酸钠的硫酸溶液在高温作用下水解，水解产物进一步与糖醛酸含量呈线性关系，可通过比色法对糖醛酸含量进行计算。

采用本发明的测定方法可以很快的测出多糖中糖醛酸的含量，省去很多麻烦，该方法具有简便易行、准确性高、重现性好、测定误差小的特点，可用于其他种类多糖中的糖醛酸含量测定。

附图说明

图1是半乳糖醛酸和玉米须多糖的紫外扫描图谱；图2是不同浓度玉米须多糖、木耳多糖和Vc对羟基自由基的清除率图；图3是Vc的总还原力图；图4是玉米须多糖和木耳多糖的总还原力图；图5是玉米须多糖和木耳多糖对DPPH自由基的清除率图；图6是Vc对DPPH自由基的清除率图；图7是超氧阴离子自由基的清除率图。

具体实施方式

以下结合图表和具体实施操作对本发明作具体的介绍。

精密称取70℃干燥至恒重的半乳糖醛酸对照品4mg置于50mL容量瓶中，以蒸馏水溶解定容，配成80μg/mL的对照品溶液。

精密称取同样条件下的玉米须多糖0.0500g，置于50mL容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀，离心（10 min，3000r/min），配成1mg/mL的多糖溶液；用同样的方法配制1 mg/mL的木耳多糖溶液。

称取0.477 g硼砂加入浓硫酸100 mL超声溶解，备用。

称取间羟基联苯0.15 g，用0.5%氢氧化钠溶液溶解并定容至100 mL容量瓶中。

精密移取80 μg/mL半乳糖醛酸0.5 mL至于10 mL容量瓶中，缓慢加入5 mL硫酸-硼砂溶液，摇匀后，至沸水浴中煮沸5 min，冷却5min至室温后，加入0.15%间羟基联苯溶液80 μL，混匀，静置20 min；蒸馏水同上操作制得空白液调零，在400-800 nm波长扫描，结果如说明书附图1所示。