[发明专利]基因工程改造的耐热人溶菌酶

说明书

本发明公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶；包括R41H和A92L两个氨基酸位点的突变:其中R41H可以提高人溶菌酶的耐热性，A92L提高了对变性剂的耐受度，而且R41H和A92L组合以后不仅可以更大幅度的提高人溶菌酶的耐热性，而且能够提高人溶菌酶对变性剂的耐受度；将本发明还公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶在高温造粒型饲料制备中的应用，所述的基因工程改造的耐热人溶菌酶的耐热性相对来说要高于一般的酶，在温度80‑85℃的高温造粒过程中，在至少前8‑30min内的活性能够维持在50％以上；本发明还公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶在食品保鲜中的应用，以耐热人溶菌酶为主要活性成分的保鲜剂，用于水产或肉制品的保鲜，可以延长低温肉制品的保质期一倍以上。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，更具体地说，本发明涉及一种基因工程改造的耐热人溶菌酶。

背景技术

来源于人体的溶菌酶是一种由人体产生的，对芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等革兰阳性菌都有抗菌作用的酶，由130个氨基酸组成，动物原的溶菌酶在结构和功能上有较强的保守性，作用机理都是可以破坏细菌细胞壁的主要结构：N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键，进而杀死细菌。由于革兰氏阳性致病菌的细胞壁主要结构由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸组成，而革兰氏阴性菌细胞壁在这两种物质组成的细胞壁之外，还有一层脂多糖的结构，因此溶菌酶对革兰氏阳性菌有很强的杀灭作用，对于革兰氏阴性菌也有较强的抑制作用。

目前应用最广的溶菌酶为鸡蛋清溶菌酶，它在蛋清中含量丰富，抑菌功能显著，还具有易于提取，生产成本低等优点。但是蛋清溶菌酶的热稳定性和对变性剂的耐受性较差，而在饲料造粒等生产过程中，往往要有高温造粒的步骤，所以蛋清溶菌酶作为饲料添加剂等生产过程中涉及高温造粒或者喷雾干燥等工艺的应用受到了很大的限制。而且鸡蛋清溶菌酶的单位活性只有人溶菌酶的三分之一。

虽然人溶菌酶相对于其他溶菌酶对于高温和变性剂的耐受性相对较好，但是仍然不能完全满足饲料添加造粒等严苛工艺，造粒过程通常采用80摄氏度以上的高温，在此温度下，绝大多数蛋白质和酶都会因为高温变性而失活。溶菌酶的耐热性相对来说要好于一般的酶，先前文献报导人溶菌酶可以在一定时间内耐受70-75℃的高温，但是这对很多温度高于80℃的工业后处理显然还不够，因此构建筛选更加耐热和耐变性剂的新型重组溶菌酶具有重要的应用价值和广阔的市场前景。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明的另一个目的是提供一种耐热人溶菌酶，其耐热性和耐变性剂能力比野生型明显提高，所述耐热人溶菌酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示；

本发明还有一个目的是提供一种编码所述耐热人溶菌酶的基因HLM，所述基因HLM的核苷酸序列如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示；

本发明还有一个目的是提供一种耐热人溶菌酶的应用，所述耐热人溶菌酶应用于养殖业，具有多方面优益效果，特别是作为饲料添加剂在80℃以上的高温造粒过程中能够保持较高的活性；用于食品保鲜，不仅具有高效的抑菌性能而且对人体安全性高。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶，其中，所述耐热人溶菌酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。

一种编码所述的基因工程改造的耐热人溶菌酶的基因HLM，其中，编码所述耐热人溶菌酶的基因HLM的核苷酸序列如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示。

一种含有所述的耐热人溶菌酶的基因HLM的真核表达载体pPicZαA-HLM。