[发明专利]一种控制1‑磷酸鞘氨醇缓释的PLGA微球的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种控制1-磷酸鞘氨醇缓释的PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)微球的制备方法。

背景技术

1-磷酸鞘氨醇作为细胞膜上普遍存在的鞘脂类化合物的代谢产物既可通过胞外受体途径又可作为胞内第二信使发挥着重要的生理学功能，在应激因子作用下，鞘磷脂酶产生神经酰胺，促进细胞凋亡；而存活因子激活鞘氨醇激酶1，致1-磷酸鞘氨醇增加而抑制神经酰胺诱导的细胞洞亡作用。细胞内神经酰胺和1-磷酸鞘氨醇间的动态平衡构成了“鞘磷脂变阻器”。研究发现，它参与很多细胞内过程，对细胞的许多生物学功能也起到重要的调节作用，其中包括：细胞的生长、增殖、分化、迁移和调亡、以及血管生成和免疫调节等。

因此1-磷酸鞘氨醇常作为细胞因子用于调节细胞生长状态，然而，1-磷酸鞘氨醇和神经酰胺形成的磷鞘脂变阻器需要维持神经酰胺和1-磷酸鞘氨醇之间的动态平衡，若想实现1-磷酸鞘氨醇调节细胞的生长变化，必须要保证1-磷酸鞘氨醇的控制释放，防止1-磷酸鞘氨醇过度抑制细胞凋亡导致细胞增殖，进而有引发肿瘤发生的可能。当前应用1-磷酸鞘氨醇促进其对细胞的调节作用的研究基本没有考虑1-磷酸鞘氨醇大量释放所带来的影响。PLGA是可降解的生物材料，常用于药剂学包载半衰期较短的药物大分子。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种乳化挥发法制备油-水-油的1-磷酸鞘氨醇缓释的PLGA微球的方法。

本发明的技术方案：

一种控制1-磷酸鞘氨醇缓释的PLGA微球的制备方法，步骤如下：

配制PVA水溶液，溶胀过夜，将溶胀后的PVA水溶液置于90℃水浴锅中振荡溶解，定容至3wt％PVA溶液；将浓度为1μg/mL的1-磷酸鞘氨醇溶液加入浓度为78-124g/L的PLGA溶液中，控制1-磷酸鞘氨醇与PLGA的质量比为2×10^-5～3.3×10^-5，超声振荡10-30分钟；再添加一定量的3wt％PVA水溶液，振荡溶解，将该混合物倒入大量3wt％的PVA水溶液中，使得PVA/PLGA的质量比为15-25，静置5-30分钟；再加入与PVA水溶液等体积的2wt％的异丙醇溶液，常温搅拌4h，高速离心机离心15分钟以上，将上清转移，得到PLGA微球；PLGA微球经过三蒸水洗沉淀多次，冷冻干燥，即得到1-磷酸鞘氨醇缓释的PLGA微球；采用BCA试剂盒对上清中的蛋白含量进行测定，进而计算微球对1-磷酸鞘氨醇的包载率。

本发明的有益效果：经荧光显微镜明场观察，微球粒径均匀分布在20微米，微球表明光滑，具有良好的缓释潜能。且微球粒径主要集中在30-50微米之间，和细胞大小接近，能够为细胞提供更大的比表面积，有利于细胞生长黏附。

附图说明

图1是100微米条件下，微球的扫描电镜图。

图2是50微米条件下，微球的扫描电镜图。

图3是微球粒径分布曲线图。

具体实施方式

以下结合技术方案，进一步说明本发明的具体实施方式。

实施例1

称取7.5g的聚乙烯醇加入锥形瓶中，向锥形瓶中加入约80mL三蒸水，保鲜膜封口，静置过夜后90℃水浴振荡溶解，在PVA完全溶解后定容至250mL。取2mL异丙醇加入98mL三蒸水中配置2％异丙醇；称取50mgPLGA，加入含有400μL的离心管中，振荡溶解；称取1μg1-磷酸鞘氨醇溶解在1mL三蒸水中配置1μg/mL的1-磷酸鞘氨醇溶液；将配置好的1-磷酸鞘氨醇溶液加入装有配置好的PLGA溶液的试管中，超声振荡10分钟，向试管中加入2.25mL3％PVA溶液，振荡2分钟，将该混合物倒入装有22.5mL3％的PVA溶液的锥形瓶中，静置5分钟，向该锥形瓶中加入25mL的2％异丙醇溶液，置于磁力搅拌器，室温搅拌4小时，将溶液转移至离心管中，15000r/min离心15分钟，将上清转移至另一锥形瓶中，三蒸水洗沉淀三次，置于-80℃冰箱冷冻过夜，24小时之后，用真空冷冻干燥机冷冻干燥得到包载了1-磷酸鞘氨醇的PLGA微球。采用BCA试剂盒对上清中的蛋白含量进行测定，进而计算微球对1-磷酸鞘氨醇的包载率。

实施例2

称取7.5g的聚乙烯醇加入锥形瓶中，向锥形瓶中加入约80mL三蒸水，保鲜膜封口，静置过夜后90℃水浴振荡溶解，在PVA完全溶解后定容至250mL。取2mL异丙醇加入98mL三蒸水中配置2％异丙醇；称取30mgPLGA，加入含有250μL的离心管中，振荡溶解；称取1μg1-磷酸鞘氨醇溶解在1mL三蒸水中配置1μg/mL的1-磷酸鞘氨醇溶液；将配置好的1-磷酸鞘氨醇溶液加入装有配置好的PLGA溶液的试管中，超声振荡10分钟，向试管中加入2.25mL3％PVA溶液，振荡2分钟，将该混合物倒入装有22.5mL3％的PVA溶液的锥形瓶中，静置5分钟，向该锥形瓶中加入25mL的2％异丙醇溶液，置于磁力搅拌器，室温搅拌4小时，将溶液转移至离心管中，15000r/min离心15分钟，将上清转移至另一锥形瓶中，三蒸水洗沉淀三次，置于-80℃冰箱冷冻过夜，24小时之后，用真空冷冻干燥机冷冻干燥得到包载了1-磷酸鞘氨醇的PLGA微球。采用BCA试剂盒对上清中的蛋白含量进行测定，进而计算微球对1-磷酸鞘氨醇的包载率。