[发明专利]基于碳量子点猝灭的荧光标记DNA的比例性荧光方法检测肝素钠

权利要求书

1.一种基于碳量子点猝灭的荧光标记DNA的比率型荧光检测肝素钠的方法，其特征在于，包括如下步骤：配置含有不同浓度肝素钠的缓冲溶液，加入碳量子点和荧光标记DNA，分别检测碳量子点和DNA的荧光；因肝素钠加入引起的荧光标记DNA的荧光升高值与碳量子点的荧光的比值作为肝素钠检测的依据；

所述DNA为5’末端标记FAM的单链DNA（FAM-ssDNA），序列为5’-FAM-TCA ACA TCA GTCTGA TAA GCT A-3’；

所述碳量子点（CQDs）由2.0 g柠檬酸和0.6 g谷胱甘肽熔融后分步加入10.0 mL多乙烯多胺反应1小时制得。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的CQDs最大激发波长345 nm。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对CQDs浓度在3.125~25 μg/mL、和反应时间在0~60分钟范围进行优化。

4.如权利要求 3所述的方法，其特征在于，选择最佳CQDs浓度为6.25 μg/mL。

5.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，加入肝素钠， 与碳量子点和荧光标记DNA溶液混匀， 室温避光放置反应10 min，再进行荧光检测。

6.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，缓冲溶液为PBS，缓冲液浓度为10 mM，且所述缓冲液pH为7.4。

7.一种肝素钠的检测方法，通过荧光分光光度法对加入不同浓度肝素钠前后FAM-ssDNA的荧光进行检测，其特征在于，所述荧光分光光度法中使用的溶液由缓冲溶液、CQDs、FAM-ssDNA和肝素钠混合而成，对比检测FAM-ssDNA与CQDs的荧光强度，应用FAM-ssDNA和CQDs的荧光强度比值检测肝素钠浓度。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，通过所述荧光分光光度法绘制的吸收光谱曲线方程为：Y=0.20791+0.52224X，R²=0.99796，Y为F/F_CQD，F和F_CQDs分别为加入肝素钠后ssDNA和碳量子点的荧光值；X 为肝素钠浓度，最低检测限(LOD)=9.04 ng/mL；所述溶液中各组分的含量为：CQDs的浓度为6.25 μg/mL，FAM-ssDNA的浓度为50 nM。