[发明专利]一种采用摇摆式间歇浸没生物反应器进行蓝莓组培苗增殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于蓝莓组培苗增殖领域，尤其涉及一种采用摇摆式间歇浸没生物反应器进行蓝莓组培苗增殖的方法。

背景技术

蓝莓主产于北美和我国长白山与大小兴安岭地区，因富含花青苷、多糖等功能性物质，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。我国蓝莓栽培技术始于20世纪末，因为蓝莓对生长条件要求比较苛刻，苗木繁殖又比较难，使得蓝莓的发展受到限制。

我国蓝莓从20世纪80年代中期开始引种，随着经济社会发展，人民生活水平的提高，蓝莓作为高档健康水果，越来越受到人们的青睐，种植面积也日益扩大，种苗生产供不应求。常规的扦插繁殖已不能满足市场对种苗的需求，目前优质蓝莓种苗的繁育主要通过组织培养技术进行工厂化生产。蓝莓组织培养多采用固体培养的方式，此技术在培养操作过程中需要大量的手工劳动，增殖率较低，是一种劳动密集型技术，且技术操作复杂，自动化半自动化程度低，消耗营养物质多，生成成本也较高。间歇浸没式液体培养技术是一种最新型的组织培养技术，它的出现逐渐克服了这些局限。国外在20世纪80年代就开始了该项技术的研究，目前技术已经成熟，大规模用于农、林业和食品等产业中。而国内相关研究起步较晚，近些年来发展较快，利用该技术扩繁的植物种类逐渐增多，推动了国内一些经济作物优质种苗的大规模生产。

液体间歇浸没培养技术，即间歇浸没式生物反应器培养系统(Temporary Immersion Bioreactors system简称TIBs)在无菌环境下，将培养材料在培养液中进行周期性的浸泡培养，达到快速繁殖的目的。这种培养方式不仅使植物组织与液体培养基紧密接触，从而刺激和促进外植体对营养元素和植物激素的吸收，而且因为介质的间歇及连续振动避免液体培养基氧气的欠缺，使培养的组培苗有更高的增殖率。同时这种培养方式减少培养环节，降低人工耗费和生产成本。

江苏农林职业技术学院从2010年开始对TIBs进行了引进吸收研究，经过不断改进，研发出新型摇摆式间歇浸没生物反应器(the Swinging type Temporary Immersion Bioreactors system简称S-TIBs)(专利号CN201220094482.8)。该反应器通过摆动架的倾斜摆动，实现了培养架上成排的容器轴向倾斜摇动，容器内的培养液周期性地翻动间歇浸没植物组织，具有结构简单、容量大、繁殖效率高、自动化程度高等特点，可连续高效地进行植物组培的生产。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种利用新型培养装置进行蓝莓组培苗增殖培养的方法，该方法能够有效提高蓝莓组培苗的增殖系数。

技术方案：本发明采用摇摆式间歇浸没生物反应器进行蓝莓组培苗增殖的方法，包括如下步骤：将蓝莓组培苗装入盛有培养液的容器，放入摆动式间歇浸没生物反应器中，设定摇摆角度42-48°，摇摆频率1次/5-7h，浸没时间25-35s/次进行增殖。

优选的，摇摆角度可为45°；摇摆频率可为6h/次。浸没时间可为30s/次。

进一步说，本发明采用的蓝莓组培苗为第5代继代组培苗。培养液包括1/2WPM、25～35g/L蔗糖及6-BA 400～600mg/L。容器中盛有的培养液的体积为200-300ml。容器中的蓝莓组培苗为55-65棵。

有益效果：与现有技术相比，显著优点为：本发明建立了蓝莓组培苗的S-TIBs增殖技术体系，通过采用第5代蓝莓、调制营养液及容积，同时设定摇摆角度、摇摆频率及浸没时间，协同作用下，能够有效提高蓝莓组培苗的增殖系数，其为传统固体培养的3-4倍，且性状稳定、生长快，组培苗60天后，苗高平均能够达到5.6cm，叶片数达到7.8片，生长健壮，起到壮苗的作用，为蓝莓种苗的高效工厂化育苗提供实验数据，促进新型组培育苗系统的推广及应用；同时，该增殖方法的外植体处理简单，效率高、速度提高2倍以上。

附图说明

图1为本发明蓝莓组培苗增殖图；

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明。

实施例1

本发明采用摇摆式间歇浸没生物反应器进行蓝莓组培苗增殖的方法包括如下步骤：

(1)外植体的选择

选择利用固体培养基培养的生长健壮的第5代蓝莓无菌继代苗作为增殖培养的外植体，在无菌操作台上用剪刀剪去顶端较幼嫩部分，减掉底部的愈伤组织。

(2)营养液配制及灭菌