[发明专利]鲶鱼内脏蛋白酶

权利要求书

1.鲶鱼内脏蛋白酶，其特征在于：所述的鲶鱼蛋白酶以鲶鱼内脏为原料，通过以下步骤得到：

1）浸提：匀浆机均质鲶鱼内脏后,加入缓冲液浸提、离心，所得上清液即为鲶鱼内脏粗提液；

2）盐析：在鲶鱼内脏粗提液中加入饱和度硫酸铵沉淀后，鲶鱼内脏粗提液与饱和度硫酸铵的重量体积比为1g:1.6~1.9ml，在4~7℃、8000~10000 r/min下离心13~18min；

3）透析：将沉淀物溶解在磷酸盐缓冲液中，在3~6℃的蒸馏水中透析20~30h，每7~10小时换1次蒸馏水；

4）纯化：将透析液采用羟基磷灰石吸附层析法制备鲶鱼内脏纯蛋白酶，羟基磷灰石用缓冲液浸泡11~14h，将得到的用洗脱液洗脱后并冷冻干燥，即得鲶鱼内脏纯蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的一种鲶鱼内脏蛋白酶，其特征在于：所述鲶鱼内脏与缓冲溶液的重量体积比为1~1.3g:0.7ml，浸提时间为3~7h。

3.根据权利要求1所述的一种鲶鱼内脏蛋白酶，其特征在于：所述浸提步骤中缓冲溶液为含有活性多肽的磷酸盐缓冲液，缓冲溶液的pH为5.6~7，缓冲液中活性多肽浓度为0.1~0.2%。

4.根据权利要求3所述的一种鲶鱼内脏蛋白酶，其特征在于：所述活性多肽的氨基酸序列为SCASRYGRRCRAGRCKGYACRCRSFAGRSRIGRCKCFRC。

5.根据权利要求1所述的一种鲶鱼内脏蛋白酶，其特征在于：所述鲶鱼内脏与缓冲溶液的重量体积比为1~1.2g:0.8ml，浸提时间为2~5h。

6.根据权利要求1所述的一种鲶鱼内脏蛋白酶，其特征在于：所述纯化步骤中的层析柱规格为直径为3~5cm，长45~60cm，流动相选用pH为6.8~7.2、浓度为0.01~0.03mol/L的磷酸盐缓冲液，流速为0.5~0.7ml/min。