[发明专利]具有自杀基因开关的靶向人间皮素的工程化免疫细胞有效
| 申请号： | 201710916606.3 | 申请日： | 2017-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN109593721B | 公开（公告）日： | 2022-11-01 |
| 发明（设计）人： | 曹卫;刘丽萍;何佳平;马安云 | 申请（专利权）人： | 亘喜生物科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C07K19/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 肖艳;王正君 |
| 地址： | 200233 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 具有 自杀 基因 开关 靶向 人间 工程 免疫 细胞 | ||
1.一种工程化的免疫细胞，所述工程化的免疫细胞为T细胞，并且所述的免疫细胞具有以下特征：
(a) 所述细胞表达靶向间皮素的CAR，并且所述的CAR结构中包含细胞自杀元件，所述的细胞自杀元件为自杀基因开关iCasp9；和
(b) 所述细胞中的PD1基因表达是被沉默的；
并且，所述CAR的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示。
2.如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，编码所述CAR的核苷酸序列如SEQ IDNO: 1所示。
3.一种制备权利要求1所述的免疫细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(A) 提供一待改造的免疫细胞；和
(B) 对所述的免疫细胞进行改造，从而使得所述的免疫细胞表达所述的CAR，并且使得所述的免疫细胞中PD1基因的表达沉默，从而获得权利要求1所述的免疫细胞;
其中，所述免疫细胞为T细胞。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(B)中，包括(B1) 将表达所述CAR的第一表达盒导入所述T细胞；和(B2) 将表达用于沉默PD1基因的第二表达盒导入所述T细胞，
其中，所述的步骤(B1)和(B2)的次序无任何限定。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的第二表达盒包含CRISPR/Cas9即sgRNA和Cas9、反义RNA 、或其组合；其中所述的sgRNA靶向PD1，且sgRNA的序列如SEQ ID NO: 3、4、5、6、或7所示。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ ID NO: 6所示。
7.一种制剂，其特征在于，所述制剂含有权利要求1所述的免疫细胞，以及药学上可接受的载体。
8.一种权利要求1所述的免疫细胞的用途，其特征在于，用于制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。
9.一种用于制备权利要求1所述的免疫细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有容器，以及位于容器内的：
(1) 第一核酸序列，所述第一核酸序列含有用于表达所述CAR的第一表达盒；
(2) 第二核酸序列，所述第二核酸序列含有用于沉默PD1的第二表达盒或sgRNA。
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