[发明专利]一种化合物、其合成方法和利用该化合物制成的试剂盒及其在谷胱甘肽检测中的应用

说明书

本发明公开了一种化合物、其合成方法和利用该化合物制成的试剂盒及其在谷胱甘肽检测中的应用，该化合物为7‑(2‑酰基噻吩)‑3H‑吩恶嗪‑3‑酮，在催化剂存在的条件下，将式Ⅱ所示的7‑羟基吩恶嗪酮钠盐与式Ⅲ所示的2‑噻吩甲酰氯混匀进行反应制备得到，该化合物可以作为荧光探针、其试剂盒可以应用于检测内源性谷胱甘肽及细胞裂解液中的谷胱甘肽领域。而且该化合物的试剂盒是一种性能优良、使用方便的谷胱甘肽检测设备，有望会成为现代生物学、生理学和医学等相关领域提供有力的研究工具。

技术领域

本发明涉及荧光探针检测技术领域，尤其涉及一种可以用作荧光探针的化合物、其合成方法和利用该化合物制成的试剂盒及其在内源性谷胱甘肽、细胞裂解液中中谷胱甘肽检测的应用。

背景技术

谷胱甘肽(glutathione,GSH)是细胞内含量最多的非蛋白类含巯基的生物小分子，具有多种生理功能，在细胞信号转导、基因调控、调节细胞内氧化还原稳态中均发挥着重要作用。因此，在临床医学中研发一种有效检测生物样品中谷胱甘肽含量的方法是具有十分重要的意义的。近年来，已有大量被报道的荧光探针用于检测生物体内的谷胱甘肽。然而，这些探针仍存在一些缺点。例如，谷胱甘肽、半胱氨酸、同型半胱氨酸具有极其相似的结构，这对探针的高选择性检测造成了极大的挑战，这也是硫醇探针普遍存在的缺点。通过添加表面活性剂提高选择性又会限制其在生物体系中的应用。这些探针存在的另一个缺陷是短波长发射，这样会引发自体荧光和生物损伤。

因此，开发一种新化合物作为谷胱甘肽的荧光探针，不但具有迫切的研究价值，也具有良好的经济效益和工业应用潜力，这正是本发明得以完成的动力所在和基础。

发明内容

为了克服上述所指出的现有技术的缺陷，本发明人对此进行了深入研究，在付出了大量创造性劳动后，从而完成了本发明。

具体而言，本发明所要解决的技术问题是：提供一种化合物、其合成方法和利用该化合物制成的试剂盒及其在谷胱甘肽检测中的应用，以提高对谷胱甘肽检测的准确性。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

第一方面，本发明提供了一种化合物，该化合物具有如式Ⅰ的结构式：

以上化合物用作检测内源性谷胱甘肽的荧光探针，名称为7-(2-酰基噻吩)-3H-吩恶嗪-3-酮。

第二方面，本发明提供了该化合物的制备方法，包括下述步骤：在催化剂存在的条件下，将式Ⅱ所示的7-羟基吩恶嗪酮钠盐与式Ⅲ所示的2-噻吩甲酰氯混匀进行反应，得到式Ⅰ所示化合物。

本发明中，作为一种优选的技术方案，所述催化剂选自有机碱和无机碱中的至少一种；所述有机碱选自三乙胺和吡啶中的至少一种；所述无机碱选自碳酸钾、氢氧化钠、碳酸钠和碳酸氢钠中的至少一种。

本发明中，作为一种优选的技术方案，所述7-羟基吩恶嗪酮钠盐、2-噻吩甲酰氯和催化剂的投料摩尔比为0.5：(1～5)：(0.5～5)，优选1:(2～4):(1～4)，更有选为1:4:4。

本发明中，作为一种优选的技术方案，所述反应的反应温度为0℃～60℃，优选为50℃，反应时间为1～24小时。

本发明中，作为一种优选的技术方案，所述反应在有机溶剂中进行；所述有机溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、三乙胺、四氢呋喃和乙腈中的至少一种。有机溶剂的用量以完全溶解反应物为准，无需特别限定其用量。

第三方面，本发明提供了利用该化合物制成的试剂盒。

所述试剂盒，包括

试剂储备液1，所述试剂储备液1为缓冲液；