[发明专利]一种耐四环素的大肠埃希氏菌及应用

说明书

本发明公开了一种耐四环素的大肠埃希氏菌应用，该菌株于2017年7月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14456。本发明还公开了上述耐四环素的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)在制备耐四环素的产品中的应用。本发明所提供的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)耐药性状稳定，半年后对其进行药敏试验，仍显示出耐药性质，该耐药菌株稳定且很难逆转。

技术领域

本申请属于生物技术领域，具体地说，涉及一种耐四环素的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)及应用。

背景技术

大肠杆菌病是人兽共患病，动物罹患大肠杆菌病的情况十分普遍，原因甚多，临床反复、多次使用相同抗生素容易导致耐药菌株的出现是其原因之一，耐药菌株使抗生素失去抗菌活性而失效。因此耐药菌株的获得，是实验室研究耐药机理、寻找替代抗菌药物的关键，也是有效控制养殖场大肠杆菌病发生的必要材料。

目前研究表明，耐药菌株的获得主要通过临床分离、环境获取、实验室药物诱导细菌耐药等。其中，药物诱导细菌耐药是实验室获得耐药菌株最为方便的途径，而且在药物诱导过程中能够发现细菌对药物的耐受情况，表观细菌对药物敏感到耐药过程、耐药规律以及对耐药机制的探索。实验室采用亚抑菌浓度的药物对质控细菌菌株进行诱导，常常出现的问题是要求较高，操作繁琐，耗费时间较长，且菌株容易出现污染等，使得该方法在短时间类不易获得耐药菌株。如何在简单有效且耗时少地获得实验室药物诱导耐药菌株，是目前困扰实验室研究人员的一大难题。

发明内容

有鉴于此，本申请针对亚抑菌浓度药物诱导细菌耐药法所出现的要求较高，操作繁琐，耗费时间较长，且菌株容易出现污染的问题，提供了一种耐四环素的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)及应用。

为了解决上述技术问题，本申请公开了一种耐四环素的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，该菌株于2017年7月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14456。

进一步地，该菌株的形态特性如下：分离菌株能够在麦康凯培养基上生长，呈红色的、凸起的、圆滑的、湿润的小菌落。

本发明还公开了一种上述的耐四环素的大肠埃希氏菌(Escherichia coli) 的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、细菌的分离培养与形态学观察：取病死鸭肝脏组织无菌接种于麦康凯琼脂平板培养基，置恒温37℃条件下培养18-24h观察细菌生长情况；挑取培养基上成粉红色的单个菌落进行革兰氏染色镜检，然后勾取相同的单个菌落接种于麦康凯琼脂平板培养基上进一步分离纯化，将分离纯化的细菌再接种到琼脂斜面上，编号为A，并保存备用；

步骤2、菌株A四环素药敏试验：将菌株A均匀涂布接种于营养琼脂培养基上，按照K-B纸片扩散法进行四环素药敏试验，判定标准参照美国临床实验室标准协会药敏纸片扩散法标准(2010版)；

步骤3、菌株A动物回归试验：将菌株A接种到营养肉汤培养基中，37℃摇振培养12h，菌液经麦氏比浊使菌液含量为1×10⁸.cfu/mL；试验健康雏鸭 10只，随机分为试验组和对照组，每组5只；试验组雏鸭肌肉注射菌液，1mL/ 只，对照组雏鸭肌肉注射生理盐水，1mL/只，观察1周并记录雏鸭发病及死亡情况；

步骤4、四环素耐药菌株诱导试验：将菌株A进行四环素药敏试验，初次可选取四环素药敏纸片抑菌圈边缘的菌再次进行四环素药敏试验，重复多次四环素药敏诱导试验，直至选出四环素抑菌圈直径变成0mm为止的耐药菌株，将此菌株编号为B₃，即制备得到权利要求1所述的耐四环素的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)。

本发明还公开了一种上述的耐四环素的大肠埃希氏菌(Escherichia coli) 在制备耐四环素的产品中的应用。