[发明专利]一种猴头菇抗过敏活性多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及抗过敏活性多糖制备技术领域，具体涉及一种猴头菇抗过敏活性多糖的提取方法。

背景技术

猴头菇(Hericium erinaceus)是国内众所周知的药食同源菌，由于其在胃炎的防治、护胃等方面具有生物活性而备受关注。目前，已对猴头菇中的多种活性成分进行了研究，如多糖、生物碱、萜类、酚酸类物质等。对猴头菇活性成分的研究也从护胃、免疫调节、抗肿瘤、抗氧化扩展到改善轻度认知障碍、抗菌、抗炎等方面。然而，关于猴头菇多糖抗过敏活性的研究比较少。市场上猴头菇的相关保健品仍以猴头菇多糖为主，而多糖的提取分离纯化方法不同，所得到的多糖结构、活性也存在差异，因此，有必要把活性与活性物质的提取方法联系起来。

透明质酸酶是将透明质酸降解为小分子的糖苷酶，而透明质酸酶的活性与I型过敏反应具有密切关系。研究表明，透明质酸酶抑制剂能抑制由抗原诱导引起的大鼠腹膜渗出细胞的组胺的释放及致敏豚鼠回肠肌过敏性收缩反应，从而对I型过敏反应有抑制作用。因此，制备一种具有抗过敏活性的猴头菇多糖对于抗过敏药物的开发具有一定的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猴头菇抗过敏活性多糖的提取方法，该提取方法采用热水浸提以及DEAE Sepharose Fast Flow （弱碱性阴离子交换剂）离子交换柱层析纯化的工艺，制备得到猴头菇抗过敏活性多糖。

本发明的目的通过如下技术方案实现。

一种猴头菇抗过敏活性多糖的提取方法，包括如下步骤：

（1）猴头菇晒干后，经粉碎、过筛，热水浸提，得到猴头菇多糖粗提液；

（2）将猴头菇多糖粗提液真空浓缩后，经Sevage试剂脱蛋白、大孔树脂脱色，再经蒸馏水透析，冷冻干燥，得到粗多糖；

（3）得到的粗多糖经DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析纯化后，依次经蒸馏水、NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，真空浓缩，得到收集液；

（4）再将收集液经蒸馏水透析，冷冻干燥，得到所述猴头菇抗过敏活性多糖（HEP）。

进一步地，步骤（1）中，所述过筛是过80目筛。

进一步地，步骤（1）中，所述热水浸提为：将过筛得到的粉末与蒸馏水按料液比1:20~1:30g/mL混合后，于75~85℃水浴加热5~6h，3000~4000r/min离心20~30min收集提取液。

进一步地，步骤（2）中，所述脱蛋白为：将真空浓缩后的猴头菇多糖粗提液与Sevage试剂按体积比2:1~4:1的比例混合后，3000~4000r/min离心10~20min，再真空旋转蒸发去除Sevage试剂。

进一步地，步骤（2）中，所述脱蛋白的次数为5~8次。

进一步地，步骤（2）中，所述大孔树脂为D315大孔树脂。

进一步地，步骤（2）中，所述脱色为：将脱蛋白后的猴头菇多糖粗提液与大孔树脂按体积比10:2~10:4的比例混合后，搅拌5~7h，过滤。

进一步地，步骤（2）中，所述蒸馏水透析为：将脱色后的猴头菇多糖粗提液转移至3000~5000Da透析袋中，蒸馏水透析40~48小时，且每6~8小时换一次蒸馏水。

进一步地，步骤（2）中，所述冷冻干燥是在-20℃预冻8~12小时，在温度-45~-40℃的冷阱中冷冻干燥38~42小时。

进一步地，步骤（3）中，所述DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析纯化为：将粗多糖用蒸馏水配制成25~50mg/mL溶液，经6000~8000r/min离心10~20min，得到的上清液用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析。

进一步地，步骤（3）中，所述蒸馏水洗脱为：1~2mL/min的流速，每管3~5min自动收集，苯酚硫酸法跟踪检测，至吸光度为0。

进一步地，步骤（3）中，所述NaCl溶液的浓度为0.1~0.2M。

进一步地，步骤（3）中，所述NaCl溶液洗脱方法与蒸馏水洗脱方法相同。

进一步地，步骤（3）中，收集洗脱液为NaCl溶液洗脱条件下，苯酚硫酸法跟踪检测的洗脱曲线中的吸收峰对应的收集液。

进一步地，步骤（4）中，所述蒸馏水透析为：将收集液转移至6000~8000Da透析袋中，蒸馏水透析40~48小时，每6~8个小时换一次蒸馏水。

进一步地，步骤（4）中，所述冷冻干燥是在-20℃预冻8~12小时，在温度-45~-40℃的冷阱中冷冻干燥38~42小时。